PCR增强剂

特别提示：包括PCR增强剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：PCR增强剂
英文名称：PCR Enhancer
产品货号：SY0040
产品规格：1ml

PCR Enhancer是一种由多种成分组成的混合添加剂，在PCR反应中，PCR Enhancer能够有效降低高GC模板和具有复杂二级结构模板的解链温度，极大地减少DNA二级结构对PCR的影响，增加PCR反应的灵敏度和特异性，且兼容几乎所有DNA聚合酶的扩增体系。当优化PCR程序无法有效扩增目的片段时，加入PCR Enhancer往往能得到意想不到的结果。本产品可能会降低PCR的保真度。因此，在进行高保真PCR时慎用。

质量控制
核酸外切酶残留检测：10 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

使用方法：本产品为1×浓度，推荐终浓度为1×。如50 μl反应体系中，加入PCR Enhancer 10 μl。
储存条件：-20℃。

除了PCR增强剂,，我公司还供应以下相关产品：



名称：PCR级甲酰胺
货号：BTN100839
规格：250mg
本产品为PCR级的甲酰胺，其可以促进某些引物、模板退火，降低带有二级结构的DNA的变性温度，是一种常用的PCR增强剂。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：通用型LAMP试剂盒
货号：BTN100203
规格：50次
本试剂盒可以用于LAMP等温扩增，LAMP即环介导等温扩增，是一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右)30－60分钟完成扩增(详细反应过程见本页面下方相关产品栏中的LAMP flash)。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

产品特点：
1.高特异性，由于同时使用4-6条特异引物，所以特异性比PCR更高。
2.高扩增效率，扩增效率可达到10E9-10E10，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的DNA分子。
3. 65℃左右等温扩增，不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板DNA外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
6. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

试剂盒组成：

成分	规格
LAMP Mix(2×)	0.5ml
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	75μl
对照引物	20μl
对照模板DNA	5μl
25mM MgCl2	0.2ml
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在冰上溶解除酶外的各种组份，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份：

成份	样品管	阴性对照
LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
FIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
BIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
F3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
B3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
Loop F引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
Loop B引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
MgCl2(25mM)	3μL	3μL
模板DNA	1-100ng	不加
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	1.5μl	1.5μl
补水到	20μl	20μl

注：如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1μL(水则少加1μL)，则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀，置于60-65℃保温30-120分钟。注意：如果不使用Loop引物，则最好保温2小时；如果使用Loop引物，则最好保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
4.产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
a)琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5μl，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱；
b)向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(另售)1μL，混匀，稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯下可见绿色荧光产生；
c)荧光定量检测。
5. 结果分析：
a)如果没有扩增，则需要用阳性对照进行扩增。本试剂盒提供5次阳性对照，反应按下表设置：

成份	阴性对照管	阳性对照管
LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
对照引物混合物	4.0μl	4.0μl
对照模板DNA	不加	1μl
MgCl2(25mM)	3μl	3μl
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	1.5μl	1.5μl
水	1.5μl	0.5μl

混匀后，置于60℃保温120分钟，其余操作同上。注意：本对照引物中没有Loop引物，所以最好保温2小时。
b)如果阳性对照能够扩增出，则说明试剂盒没有问题，可能是模板或引物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带，则是试剂盒的问题，请跟厂家联系。

注意事项：
1.引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外，尽量以保守区设计引物。
2.引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4.反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起，配制成10×浓度以方便使用。
6. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUTP(可能导致反应效率下降)、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试剂必须全部更换，必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。