转氢酶-1测试盒(微量法)

特别提示：包括转氢酶-1测试盒(微量法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：转氢酶-1测试盒(微量法)
产品货号：SK096-1
产品规格：100管/96样

测定意义:
TH位于线粒体的内膜上，又称为呼吸电子传递链复合体六，催化NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互转化。催化正向反应称为TH-1。线粒体NADH含量增加时会导致线粒体膜的H+电化学梯度升高，因而促进了电子传递链上ROS的产生。TH-1促进NADH转换为NADPH，从而提高线粒体的抗氧化能力。

测定原理：
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。用人工合成底物3-乙酰吡*腺嘌呤二核苷酸磷酸(APADP+)替代NADP+，TH-1催化 APADP+还原生成的APADPH在375nm有特征光吸收，因此通过测定375nm光吸收增加速率，来计算TH-1活性。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

除了转氢酶-1测试盒(微量法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：ATP检测试剂盒
货号：YT361
规格：200次
本试剂盒可以用于检测普通溶液、细胞或组织内的ATP水平。细胞和组织样品一步裂解即可完成样品制备，检测灵敏度高达1nmol/L，化学发光可以持续稳定达30分钟，并且获得的样品还可以同时进行Western检测。本试剂盒的使用方便快捷，通常10-20个样品可以在30-60分钟内测定完毕。一个包装的本试剂盒至少可以检测200个样品。

试剂盒组分：
ATP检测试剂—————————2ml(0.5ml/管，共4管)
ATP检测试剂稀释液——————20ml
ATP标准溶液(0.5mM)——————0.1ml
ATP检测裂解液————————100ml

ATP作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP水平的改变，会影响细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生。

样品制备非常简单。本试剂盒提供了可以用于细胞和组织裂解的ATP检测裂解液，简单裂解后即可用于ATP检测。无需进行高氯酸或三氯乙*(TCA)抽提，或样品裂解后的煮沸等繁琐操作。

本试剂盒根据萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)催化荧光素产生荧光时需要ATP提供能量研制而成。 当萤火虫荧光素酶和荧光素都过量时，在一定的浓度范围内荧光的产生和ATP的浓度成正比。这样就可以高灵敏地检测溶液中的ATP浓度。本试剂盒在样品体积为100微升时可以检测浓度低达1nmol/L的ATP。而常规的细胞或组织裂解液中ATP的浓度仅为0.1-1μmol/L，一些常见细胞的细胞内ATP水平约为10nmol/mg蛋白。并且本试剂盒的检测浓度范围非常大，检测上限可以高达10μmol/L，并在5nmol/L-10μmol/L范围内可以形成良好的标准曲线。

本试剂盒进行了特殊的优化设计，使检测ATP时的化学发光非常稳定。对于ATP标准曲线的检测结果显示，在开始反应后10分钟内化学发光无明显下降，开始反应后30分钟内化学发光的下降不超过10%。

使用本试剂盒中的ATP检测裂解液裂解获得的细胞或组织样品，不仅可以用于ATP检测，还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些常规的较易溶解蛋白的Western检测。

注意事项：
1. ATP检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试ATP检测试剂反复冻融5次对于其检测效果无明显影响，为取得较好的使用效果，建议用户使用时的冻融次数不宜超过3次。ATP检测试剂稀释成ATP检测工作液后，最好一次用完，不宜冻存后再使用。
2. ATP特别是裂解后样品中的ATP在室温不太稳定，需在4℃或冰上操作。ATP在冰上可以稳定长达6小时。
3. 本试剂盒需使用luminometer，即化学发光仪(检测荧光素酶报告基因时所用的仪器)。如果没有luminometer，也可以使用液闪仪。液闪仪的测定效果取决于液闪仪的检测灵敏度和检测精度。
4. 使用可检测化学发光的多功能酶标仪时，所用96孔板宜为孔和孔之间不透光的黑板或白板。如使用常规的透明96孔板，需特别注意正确设置酶标仪测定时板子的类型，同时也可以在检测孔之间设置间隔孔，以尽量避免邻近孔之间的相互干扰。
5. 本试剂盒提供的ATP检测裂解液可以有效裂解并释放常见的培养细胞和组织中的ATP。对于一些特殊的组织或样品，如果发现检测出来的ATP水平显著低于预期水平，可以在裂解样品后并且在离心前，取部分样品煮沸2分钟以充分释放ATP。煮沸后样品中的蛋白会变性，从而会在后续的离心步骤中被沉淀，因此煮沸的样品不能用于蛋白浓度测定、SDS-PAGE和Western检测。可以使用剩余的部分样品进行蛋白浓度测定、SDS-PAGE和Western检测。

储存条件：-20℃，有效期6个月。