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- 2025年09月19日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负80度
- 保质期：
3年
- 英文名：
pSET152①质粒菌种
- 库存：
100
- 供应商：
上海柯雷生物
- 规格：
20ul
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文献和实验一、原理1、E .coli 表达系统E .coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E .coli 菌株以后，通过温度的控制，诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质，将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。2、外源基因的诱导表达提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减轻宿主菌的负荷。常用的有温度诱导和药物诱导。本实验采用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔（IPTG）诱导外源基因表达。不同的表达质粒表达方法并不完全相同，因启动子不同，诱导
基因克隆的四大要素(Four Elements for Gene Cloning)
一、受体细胞 ：受体细胞的选择是否合适将关系到能否表达，特别是高效表达。首先要注意不同的表达载体与受体细胞的关系，即原核表达载体适合原核细胞，真核载体则适合真核细胞，而农杆菌仅适用于植物细胞。即使大肠杆菌质粒，也应注意选择合适的菌种。例如，当用含有T7 噬菌体启动子的载体表达外源基因时，由于T7 启动子只能被其本身的RNA 聚合酶（T7 RNA 聚合酶）所识别，所以必须使用具有产生T7 RNA 聚合酶能力的受体菌，如：BL21（DE3）、JM109（DE3）。对于一些缺失β-D-半乳糖酶氨
(24:1)，振荡混匀 1 min，12,000 rpm 离心 2 min，将上层水相移至另一离心管中，加入 0.1 倍体积 3M NaAc(pH5.2) 和 2.5 倍体积无水乙醇，置-20 ℃ 沉淀 15~30 min，然后离心 15 min；10. 弃上清，加入 70% 乙醇 ( 注意不要混合)，12000 rpm 离心 10 min；11. 弃上清，真空干燥或自然干燥质粒 DNA；12. 用去离子水溶解质粒 DNA，-20 ℃ 保存备用。（二）质粒的大量制备:1. 将 5 mL 转化菌种
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