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- 2025年09月19日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负80度
- 保质期：
3年
- 英文名：
pSET152②质粒菌种
- 库存：
100
- 供应商：
上海柯雷生物
- 规格：
20ul
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文献和实验，约每克湿菌加3 mlTE 缓冲液。② 按超声处理仪厂家提供的功能参数进行破菌；10 000g 离心，15min ，分别收集上清液和沉淀。③ 分别取少量上清和沉淀，加入等体积的2× 凝胶电泳加样缓冲液，进行SDS -PAGE 。注意事项：超声破碎与声频、声能、处理时间、细胞浓度、菌种类型等因素有关，应根据具体情况掌握；超声波破菌前，标本经3 -4 次冻溶后更容易破碎。2 ）包涵体的分离蛋白质在细菌中的高水平表达，常形成相差显微镜下可见到的细胞质颗粒，即为包涵体，经离心沉淀后可用Triton
基因克隆的四大要素(Four Elements for Gene Cloning)
一、受体细胞 ：受体细胞的选择是否合适将关系到能否表达，特别是高效表达。首先要注意不同的表达载体与受体细胞的关系，即原核表达载体适合原核细胞，真核载体则适合真核细胞，而农杆菌仅适用于植物细胞。即使大肠杆菌质粒，也应注意选择合适的菌种。例如，当用含有T7 噬菌体启动子的载体表达外源基因时，由于T7 启动子只能被其本身的RNA 聚合酶（T7 RNA 聚合酶）所识别，所以必须使用具有产生T7 RNA 聚合酶能力的受体菌，如：BL21（DE3）、JM109（DE3）。对于一些缺失β-D-半乳糖酶氨
(24:1)，振荡混匀 1 min，12,000 rpm 离心 2 min，将上层水相移至另一离心管中，加入 0.1 倍体积 3M NaAc(pH5.2) 和 2.5 倍体积无水乙醇，置-20 ℃ 沉淀 15~30 min，然后离心 15 min；10. 弃上清，加入 70% 乙醇 ( 注意不要混合)，12000 rpm 离心 10 min；11. 弃上清，真空干燥或自然干燥质粒 DNA；12. 用去离子水溶解质粒 DNA，-20 ℃ 保存备用。（二）质粒的大量制备:1. 将 5 mL 转化菌种
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