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- 文献和实验
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- 保存条件:
负80度
- 保质期:
3年
- 英文名:
pUCGM抗性基因质粒
- 库存:
100
- 供应商:
上海柯雷生物
- 规格:
20ul
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文献和实验【求助】将报告基因质粒转染到癌细胞中,是否都要共转染一个带有抗性基因的质粒来筛选阳性克隆?
lsdcfhyj 将报告基因质粒转染到癌细胞中,是否都要共转染一个带有抗性基因的质粒来筛选阳性克隆? 很多文献是这样做的,可是我认为报告基因质粒本身就带有抗生素标记基因,为什么还要共转染另一个抗性质粒?一直对着个问题很困惑,请懂这方面知识的前辈指点指点?还有就是质粒使用量的问题,我不清楚到底质粒用量与转染细胞之间到底是个什么样的比例合适,看了很多操作步骤,有的一个六孔板一孔就要用1到2微克,可是商家产品就有1微克包装的,这样的话,那用量未免
1、质粒的概念 质粒(Plasmid)是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子,能够独立于宿主染色体进行自我复制,并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因(如抗生素抗性基因)。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型,如用于保存序列信息的克隆质粒(如:pUC 系列质粒),用于表达蛋白的质粒(如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒),用于基因编辑的质粒(如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
体长4362 bp,它有一个来自大肠杆菌中高拷贝天然质粒的复制起点(ori),这个复制起点可使pBR322在大肠杆菌中的拷贝数达到20个,因而pBR322载体的DNA很容易从大肠杆菌中提取出来。这是pBR322中的第一个结构特征。 图1 大肠杆菌克隆载体pBR322的物理图谱 此载体中有两个标记基因,一个是氨苄青霉素抗性基因(Apr),另一个是四环素抗性基因(Tcr)。氨苄青霉素和四环素都是人类治疗疾病的抗生素药物。当把pBR322 DNA转化大肠杆菌细胞,其中部分细胞就被该载体
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