pET28a-mMLV转录酶基因质粒

反转录过程中需要考虑哪些因素？

流程、简单的处理步骤和较少的 RNA 损伤。可选择在反转录前使 ezDNase 酶失活，因为酶不会切割引物、ssRNA 或 cDNA:RNA 复合物。 三、反转录酶选择 反转录酶以 RNA 为模板合成 cDNA，但这一类反转录酶可能具有不同的功能活性和性质。它们的性质会影响其反转录长链 RNA、高 GC 含量 RNA、具有复杂二级结构的 RNA 和不纯 RNA 的能力。 分子生物学中使用的大多数反转录酶来源于禽成髓细胞瘤病毒（AMV）或莫洛尼鼠白血病病毒（MMLV）的 pol 基因。AMV 反转录酶

教您正确选择逆转录酶，适用 6 种不同应用

的编码和长非编码 RNA）、测定基因表达、发现剪接变异和融合转录物以及检测低丰度基因的的高通量方法。与基因芯片相比，RNA-Seq 的优点包括动态范围更大、灵敏度更高以及可在无基因组信息的情况下表征 RNA 序列。 逆转录酶的保真度可能在 RNA 测序等序列准确度至关重要的情况下发挥重要作用。逆转录酶的保真度指的是 RNA 逆转录为 DNA 过程中的序列精确度。保真度与逆转录错误率成反比。据报道，基于 MMLV 的逆转录酶错误率在合成 15,000 到 27,000 个核苷酸中有一个错误核苷

内参照定量PCR

强度，然后对模板的浓度作图。因为内参照与特异的mRNA在同一体系中的共同扩增效率在PCR对数期内是相同的，因此,可用标准曲线对特异mRNA进行定量。现以质粒AW108cRNA为内参对照来确定Jurkat细胞诱导产生的IL-2 mRNA量为例。 材料与试剂 1. RNA提取所需试剂与材料 2. MMLV逆转录酶 3. 32 P末端标记引物（IL-2引物序列见第九章，放射性标记见第四章相应内容） 4. dNTP，Tag DNA