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- Xybio
- 上海
- P0321
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pE-mMLV
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pET28a-mMLV转录酶基因质粒
别称: pE-mMLV
启动子：T7o
复制子: pUC
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
|---|---|
| 3'测序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pE-mMLV非全长质粒，非表达质粒，具体的请参考测序报告，可以参考NCBI的序列是：AF033811.1
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3986/pCMV-SPORT6-OIP5人源基因质粒 |
| P3987/pCMV-SPORT6-HYLS1（1点突变）人源基因质粒 |
| P3988/pCMV-SPORT6-TBPL1人源基因质粒 |
| P3989/pCMV-SPORT6-RPL3人源基因质粒 |
| P3990/pCMV-SPORT6-UBE2Z（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3991/pCMV-SPORT6-KCNS3人源基因质粒 |
| P3992/pCMV-SPORT6-MVK人源基因质粒 |
| P3993/pCMV-SPORT6-NXF2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3994/pCMV-SPORT6-BIRC2人源基因质粒 |
| P3995/pCMV-SPORT6-RWDD4（1点突变）人源基因质粒 |
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文献和实验流程、简单的处理步骤和较少的 RNA 损伤。可选择在反转录前使 ezDNase 酶失活，因为酶不会切割引物、ssRNA 或 cDNA:RNA 复合物。 三、反转录酶选择 反转录酶以 RNA 为模板合成 cDNA，但这一类反转录酶可能具有不同的功能活性和性质。它们的性质会影响其反转录长链 RNA、高 GC 含量 RNA、具有复杂二级结构的 RNA 和不纯 RNA 的能力。 分子生物学中使用的大多数反转录酶来源于禽成髓细胞瘤病毒（AMV）或莫洛尼鼠白血病病毒（MMLV）的 pol 基因。AMV 反转录酶
的编码和长非编码 RNA）、测定基因表达、发现剪接变异和融合转录物以及检测低丰度基因的的高通量方法。与基因芯片相比，RNA-Seq 的优点包括动态范围更大、灵敏度更高以及可在无基因组信息的情况下表征 RNA 序列。 逆转录酶的保真度可能在 RNA 测序等序列准确度至关重要的情况下发挥重要作用。逆转录酶的保真度指的是 RNA 逆转录为 DNA 过程中的序列精确度。保真度与逆转录错误率成反比。据报道，基于 MMLV 的逆转录酶错误率在合成 15,000 到 27,000 个核苷酸中有一个错误核苷
强度，然后对模板的浓度作图。因为内参照与特异的mRNA在同一体系中的共同扩增效率在PCR对数期内是相同的，因此,可用标准曲线对特异mRNA进行定量。现以质粒AW108cRNA为内参对照来确定Jurkat细胞诱导产生的IL-2 mRNA量为例。 材料与试剂 1. RNA提取所需试剂与材料 2. MMLV逆转录酶 3. 32 P末端标记引物（IL-2引物序列见第九章，放射性标记见第四章相应内容） 4. dNTP，Tag DNA
