pCMV-RUNX2-m小鼠基因质粒

实验操作篇

质粒转染细胞的效率受到多种因素的影响，如细胞的类型，细胞的状态，转染时细胞的密度，转染的方式（电转或化转），DNA 的质量、转染试剂的选择等。从质粒角度来看，超螺旋比例高，且内毒素残留低的质粒会更有利于提高细胞转染的效率。 pCMVβ DNA 用不同试剂盒提取，转染  Huh-7 细胞，转染效率对比   5. 质粒酶切有问题，切不开或者酶切有杂带   酶切切不开可能跟酶本身状态、酶切缓冲液、酶切温度以及质粒本身都有关系。从酶切条件考虑，在确保酶活性的前提下，选择合适的酶切缓冲液、温度

【共享】题录集：静脉大容量快速注射siRNA或质粒

肝内的高效表达. 科学通报.2003.048(005).-447-451 复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室，上海200433 [摘要] 尾静脉大容量快速注射裸质粒DNA能够介导外源基因在动物肝内高效表达，采用此方法将人凝血因子Ⅸ(hFIX)表达质粒pCMV-hFIX 2.2mL于7s内导入小鼠体内，hFIX在小鼠体内表达水平最高为2921ng/mL(血浆）。hFIX表达水平与裸质粒DNA注射剂量呈正相关，重复注射的hFIX表达水平偏低（最高1459ng/mL)。PCR检测发现

Gateway技术：克隆、表达新方法

的克隆方法将目的基因克隆进入门载体。 （2）混合包含目的基因的入门克隆和合适的目的载体以及Gateway LR Clonase酶，构建表达克隆。（表达克隆用来在合适的宿主中进行蛋白的表达和分析。） 有几种方法可以构建Gateway入门克隆。无论您选择何种方法，创建的入门克隆都是准备用来与各种目的载体进行重组。 （1）PCR克隆（定向TOPO克隆至入门载体或与供载体B×P重组） （2）限制性内切酶消化和连接进入入门载体 （3）使用pCMV•SPORT6或pEXP-AD502*构建