mEos3.2-Clathrin-15人源基因质粒

原核表达实验方法

液。(2 )2×SDS -PAGE 凝胶电泳加样缓冲液：100 mmol / L Tris-HCI (pH 8 .0 )100 mmol / L DTT4 %SDS0.2 % 溴酚蓝20 % 甘油三、实验方案1、外源基因的诱导表达(1 ）用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA 和目的基因。(2 ）按连接步骤连接目的基因和载体，并转化到相应的宿主菌。(3 ）筛选出含重组子的转化菌落，提取质粒DNA 作限制性内切核酸酶图谱，DNA 序列测定，确定无误后进行下一步。(4 ）如果表达载体的原核启动子为PL 启动

手把手教你做好体外 DNA 重组

.Na2,（pH8.0）2. 细菌裂解液: 0.2 mol/L NaOH，1% SDS3. 中和液: 60 mL 5M 醋酸钾，11.5 mL 冰醋酸，28.5 mL 双蒸水4. 3 mol/L NaAc (pH 5.2)5. TE 饱和酚 (pH8.0)6. 氯仿/异戊醇 = 24:17. RNase（20 mg/mL）【实验方法与步骤】（一）质粒的小量制备:1. 将 5 mL LB 培养液 (含筛选抗生素) 加入到容量为 15 mL 并通气良好的试管中，然后将转化菌的一个单菌落接种于培养

细胞转染实验

一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入