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- 钰博生物
- YB-11-128
- 中国/美国
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
H5N1禽流感荧光定量PCR检测试剂盒（不含反转录）
- 保质期：
保存期限一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次/盒
1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 两管式 RT-PCR，一次 RT 反应产物可以作为多次 PCR 的模板。本试剂盒提供 10 次的 RT 反应试剂和 50 次的 PCR 试剂。
3. 引物经过优化，特异性高，引物是根据基因的保守区域设计，适用于所有强、中、弱新城疫毒株，产物长度为 421 bp。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
H5N1禽流感荧光定量PCR检测试剂盒（不含反转录）特点优势：
1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
H5N1禽流感荧光定量PCR检测试剂盒（不含反转录）性能指标：
1. 试剂盒检测特异性为100%
2. 检测试剂盒重现性为100%
3. 灵敏度可达到103/ml
4. 有效期为6个月
规格及成分
| 成分 | 编号 | 50 次纸盒包装 |
| MMLV 逆转录酶 (含 RI) | 80206A | 20 μL |
| RT Buffer（含 dNTP） | 60906C | 60 uL |
| PCR Mix 3.0（含染料） | 90805 | 1.5 mL |
| ND 阳性对照 | 896897 | 50 μL |
| ND 专一性引物一（正向引物） | yw896 | 50 μL |
| ND 专一性引物二（反向引物） | yw897 | 50 μL |
| RNase-free 水 | 80403 | 1 mL |
| 使用手册 | 11-171201sc | 1 份 |
自备试剂：样品 RNA。
H5N1禽流感荧光定量PCR检测试剂盒（不含反转录）使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆转录）反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）:
| RNA 模板 | 0.01pg-500 ng （如果丌知道浓度则用 1-10 μL） |
| ND 专一性引物二（反向引物） | 2 μL |
| RNase-free 水 | 补水到 12 μL |
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。
三、PCR（60 μL 体系）
1、在 PCR 管中加入下列成分：
| 成 份 | 样品 | ND 阳性对照 | 阴性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 30 μL | 30 μL | 30 μL |
| cDNA 样品（上步的 RT 反应液） | 1-5 uL | 无 | 无 |
| ND 阳性对照 | 无 | 2 μL | 无 |
| ND 专一性引物一（正向引物） | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| ND 专一性引物二（反向引物） | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| 补水到 | 60 uL | ||
| 过程 | 温度 | 时间 | 其他 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | |
| PCR 反应 （40个循环） |
95℃ | 30 s | |
| 50℃ | 30 s | ||
| 72℃ | 40 s | ||
| 最后延伸 | 72℃ | 5 min | |
1、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳，正确的扩增产物的大小为421 bp。
关联产品 绿如蓝核酸染料
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文献和实验如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
过程，无RNA损失。这就需要裂解液即可迅速裂解细胞，高效的保护RNA，又不会影响高效反转录反应，且对于后续荧光定量PCR无抑制作用。FastLine细胞到cDNA快速制备试剂盒（KR105，TIANGEN），一站式完成从细胞到cDNA的快速制备，同时去除基因组DNA残留，整个操作流程仅需50 min，获得的cDNA不但可以直接进行荧光定量 PCR还可以和正常提取RNA后进行第一链反转录后得到的cDNA一样，冷冻保存供以后使用，是从少量细胞快速制备cDNA的最佳选择，并可实现高通量检测。 图
进行2种或以上的反应，则要选择其他的方法，最常用的是Taqman、Molecular beacon，这两种都是探针的方式，由于增加了探针的特异性，因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线，不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术，以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高，有时设计的探针并不合适，有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题，据说取得Molecular beacon的许可权的成本
，即在一个反应管中进行2种或以上的反应，则要选择其他的方法，最常用的是Taqman、Molecular beacon，这两种都是探针的方式，由于增加了探针的特异性，因此其扩增曲线反映的就是特异性产物的扩增曲线，不含有非特异性扩增的成分。因此商业用途的检测试剂盒大都采用这一技术，以减少非特异性产物造成错误结论的可能性。其缺点在于探针成本较高，有时设计的探针并不合适，有造成损失的可能性。并且要进行较多的实验条件的优化。这两种探针技术用于商业目的时都有专利问题，据说取得Molecular beacon的许可
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