Hipro DNA Assembly Cloning kit

Hipro DNA Assembly Cloning kit


产品概述
Hipro DNA组装克隆试剂盒可以高效、准确的组装DNA片段，从而实现简单快速的无缝克隆。该产品可以在一管内，恒温条件下，有效的连接多个带有重叠序列的片段，广泛应用于基因的快速定向克隆，实验过程涉及的反应机理如下：
（1） 利用外切酶活性产生单链3‘ 突出端，促使互补的末端重叠序列（15-20 bp）退火；
（2） 互补末端一旦退火完成，聚合酶活性会沿3‘延伸填补退火片段的缺口；
（3） 缺口补平后，利用DNA连接酶的连接酶活性完成DNA切刻处的修复，形成完整的重组载体。
整个过程只需在50℃下反应5-15 min即可完成，一次反应可兼容1~5个片段的同源重组，内含高保真DNA聚合酶和高保真DNA连接酶可确保重组准确进行，连接产物可进行多种化学感受态大肠杆菌的转化，阳性率接近100%。


产品内容

组分	YB001A	YB001B
Hipro DNA Assembly Mix	125 μL	250 μL
pDA-Zero vector，linearied（50 ng/μL）	25 μL	50 μL
500bp control insert（20 ng/μL）	5 μL	10 μL

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产品优势
快速：5 ~15min即可完成连接反应。
兼容性强：可完成1~5片段的同源重组。
方便快捷：2×预混液包装，减少加样次数，使得克隆更为高效。


实验案例
1.单片段同源重组

        以线性化的pDA-Zero vector、与2× PfuMax HiFi PCR ProMix（英赞，P216）扩增所得0.5kb DNA片段作为同源重组的底物，用Hipro DNA Assembly Mix进行50℃，5min快速同源重组后，转化到DH5α感受态细胞，培养12-16 h后，平板菌落生长状况如图1所示，随机挑取30颗单克隆用载体通用引物进行菌落PCR，后进行琼脂糖凝胶检测，如图4所示，分析上述结果可得，Hipro DNA Assembly Mix具有优异的重组效率和阳性率。

2.多片段同源重组


 
       以线性化的pET-28a载体、与2× PfuMax HiFi PCR ProMix（英赞，P216）扩增所得0.5 kb 、1.0 kb、2.0 kb DNA片段作为同源重组的底物，用Hipro DNA Assembly Mix进行50℃，15min快速同源重组后，转化到DH5α感受态细胞，培养12-16 h后，平板菌落生长状况如图3所示，随机挑取28颗单克隆用载体通用引物进行菌落PCR，后进行琼脂糖凝胶检测，如图4所示，分析上述结果可得，Hipro DNA Assembly Mix具有优异的重组效率和阳性率。
 
应用范围
单片段同源重组，多片段同源重组，快速克隆


产品存储
-20℃保存