- ￥1800
- ATCC来源
- 中国
- YS777C
- 2025年07月08日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 细胞类型：
I类
- 品系：
优良品
- 组织来源：
ATCC来源
- 物种来源：
ATCC来源
- 细胞形态：
贴壁
- 器官来源：
ATCC来源
- 运输方式：
常温运输或冻存干冰运输
- 年限：
3~5代
- 生长状态：
优良
- 规格：
5×106cells/T25细胞培养瓶
产品规格：5×10^6cells/T25细胞培养瓶
生长条件：
| 培养条件 | 具体培养基条件请咨询我们 |
| 温度 | 37℃ |
| 空气条件 | 5% CO2，95% AIR |
| 传代方法 | 1:2传代，2~3天换液 |
| 冻存条件 | 90%FBS+10%DMSO |
rRTEC大鼠肾小管上皮细胞，使用方法
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
rRTEC大鼠肾小管上皮细胞，细胞传代：收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：
（一）细胞未长至 85%时，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留 6-8ml 培养液继续培养。
（二）细胞已长满（达 85-95%）。即可进行传代，具体步骤如下：
1.弃去培养液，用 PBS 洗涤 1-2 次，
2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍甁壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入双倍的含 10%血清的完全培养液，终止消化并轻轻吹打细胞，使其变成单细胞悬液，
3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散，
4.加入新鲜培养液重悬细胞，进行传代、冻存，
5.如果没有特别说明，建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2。
rRTEC大鼠肾小管上皮细胞，常见问题及解决方法：
1、观察细胞密度最好用（4X物镜）低倍镜观察，以便正确的判断细胞密度；观察细胞形态请用（10X 或 20X）高倍镜观察；
2、瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养；
3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重悬后接种到新瓶内；
4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、漏液及细胞污染，请及时与我们联系。
5、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
6、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2 小时后观察，
7、如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 8-10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 85-95%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁， 将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我 们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
8、细胞消化铺板，细胞死亡较多。 第一消化时间掌控好切勿消化过度，第二终止要完全（以T25瓶为例，加1ml胰酶用5ml完全培养基终止），第三控制吹打次数和力度，避免损伤。
我公司代理销售ATCC来源，sciencell来源，上海细胞库来源等细胞销售，另我公司有自建细胞库，生产培养各类细胞系，采用灌注法制备各种原代细胞。
欢迎新老客户咨询订购：rRTEC大鼠肾小管上皮细胞
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文献和实验本人把大鼠原代肾小管上皮细胞的取材、培养方法进行了总 结，请分享！ 取材：1.肾小管节段的分离(机械网筛滤过法)： ①取 Wistar 大鼠断颈法处死，立即置入碘伏液中浸泡 5 分钟。 ②将大鼠转移入超净工作台，取腰部切口迅速取出肾脏，置于盛有生理盐水的培养皿中清洗并除去包膜和肾蒂组织。 ③取皮质置于80目筛网上，剪碎成1-2mm3大小组织块，网下放盛有少量生理盐水的培养皿。 ④用玻璃注射器内芯于80目网上充分研磨组织。 ⑤收集 80 目网下液体转移至 100
培养方法： 大鼠原代足细胞： 丁香园网友gaoxueyan99的观点为： 培养方法：过筛：100目，150目，200目，收集200目内为小球 1、选取100克左右大鼠，无菌取肾，去包膜，分离皮质，剪刀切成小块！ 2、100目上注射器芯研磨，DMEM培养液冲洗100目网筛多遍，DMEM冲洗200目内组织！ 3、离心管收集，1000转离心5分钟！ 4、完全培养基重悬沉淀，接种于培养瓶或皿！一只大鼠一皿或一瓶！ 5、5％CO2，37度培养箱最内测放置
水洗；④人孵育液，37C孵育2～4小时；⑤双蒸水洗2―3分钟；⑥入1％硫化铵液(新鲜配制)l一2分钟；⑦蒸馏水冲洗；⑧甘油明胶封固。3)结果与评价：阳性反应部位呈棕褐色硫化铅颗粒。该酶为可溶性酶，以冷固定效果较好，一般溶酶体膜为不通透性膜，但经冰冻熔化或福尔马林固定处理后，孵育液内的作用底物则进入溶酶体而被酶作用。酸性磷酸酶铅法染色大鼠肾小管上皮细胞呈棕色为酸性磷酸酶肛拦反应4)注意事项：孵育液内铅离子浓度是反应的关键因素，必须新鲜配制，立即使用。因为当铅离子浓度过低时，产生的磷酸离子未能完全被结合
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