膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)

特别提示：包括膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)
英文名称：Membrane protein extraction kit (2D electrophoresis)
产品货号：HR0185
产品规格：50T/100T

哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。
去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
双向电泳膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织提取双向电泳用膜蛋白样品。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可直接用于双向电泳蛋白研究。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液A和B 2-8℃保存；试剂C室温保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．将蛋白提取的时间缩短至 30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒
使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法：
A．细胞蛋白提取
1．取5-10×106个以上细胞①，在4℃，500g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2．用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.细胞样品中加入200μl冷的试剂A，2μl蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上10-15分钟。
4．再次高速涡旋振荡 5秒，然后在4℃，13000×g条件下离心5分钟。
5．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴5-10分钟，37℃下②1000g力离心3分钟，此时溶液分为两层(对着光线看)，下层是膜蛋白部分约为20μl。
6．移除上层溶液和界面层，收集下层膜蛋白样品。一般可直接跳过步骤 7和步骤8 直接进行步骤9，如果对膜蛋白样品纯度要求极高，可以进行步骤7或者步骤7和8，此时膜蛋白回收率会稍有降低。
7．用 150-200μl冰冷的试剂B 稀释下层膜蛋白样品，混匀后冰浴2min，37℃水浴5-10分钟，37℃下②1000g 力离心3分钟，此时溶液分为两层(对着光线看)，下层是膜蛋白部分约为20μl。
8.按步骤 7 再次抽提有机相(此步骤可以选做)。
9．用 80-150μl试剂C 稀释下层膜蛋白样品。
10．将上述蛋白提取物分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注：
①细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
由于膜蛋白含量较少，需要较多的细胞才能保证得率。
② 必需保证在37℃左右下离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心机在室温离心即可，适当缩短离心时间至2-3分钟。
B．组织蛋白提取
1．取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨)，冰上静置5分钟，小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。
2.在 4℃，500g条件下离心2-3分钟，弃上清。
3．按照细胞蛋白的提取方法的第 3 步骤往下操作即可。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。

除了膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用),，我公司还供应以下相关产品：



名称：细菌总蛋白质微量提取试剂盒
货号：BTN90902
规格：30次
本试剂盒适用于细菌天然总蛋白的快速微量提取，可用于各种后续实验研究。

产品特点：
1．可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液或冰冻菌体沉淀。
2．在 1.5mL塑料离心管中操作，适用于大规模的快速筛选。
3．采用温和的中性裂解成分，蛋白保持天然活性。
4．产率是5-10mg蛋白质/mL细菌。
5．无须昂贵设备，无需溶菌酶、超声波破碎等复杂的操作步骤，离心分离即可得到，简单便捷。
6．得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、免疫印迹分析、蛋白活性测定和BCA法和及Lowry法蛋白定量(不适用于Bradford法)。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	15ml
溶液B	1.5ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

1．取 1mL 过夜培养的细菌，12000rpm离心1分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体。如为冰冻保存的菌体沉淀可直接进行第2 步。
2．每 10mg 湿重菌体沉淀加入0.5mL溶液A和50μL溶液B，吹打混匀。
3．冰上放置30分钟至1小时至菌液变清。
4．4℃ 12000 g离心1分钟。
5．将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分样品到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液(终浓度为1×)，在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

名称：红细胞裂解液
货号：RFT158
规格：120ml
本裂解液是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。本裂解液经过优化配方，主要有效成分为氯化铵，在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞或其它有细胞核的细胞。本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解，例如鸟或禽类的红细胞。本裂解液经过无菌处理，处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。

使用方法：

一、对于组织细胞样品：
1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2、加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入3-5ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。
3、400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

二、对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤：
1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2、对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。本步骤在室温或4度操作均可。
3、加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
4、400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
5、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。

三、对于血液样品：
1、取新鲜抗凝血，400-500g离心5分钟，离心弃上清。
2、加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入6-10ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。注意：对于鼠的血液，裂解1-2分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至4-5分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
3、400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注意：对于微量或少量的血液样品，可以在第一步中不进行离心弃上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液体积的红细胞裂解液，并在室温或4℃裂解4-5分钟。对于鼠的血液，裂解4-5分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，但通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。

四、对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤：
1、每1ml新鲜抗凝血中加入10ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解4-5分钟。本步骤在室温或4度操作均可。注意：对于鼠的血液，裂解4-5分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，但通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
2、加入20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
3、400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。

注意事项：
1、本裂解液为无菌产品，请注意保持无菌，使用本产品时宜在超净工作台内进行。
2、如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总RNA的提取，在处理细胞时不必使用经过DEPC处理过的溶液。

储存条件：4℃，有效期12个月。