电泳级SYBR Green I

特别提示：包括电泳级SYBR Green I在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：电泳级SYBR Green I
英文名称：SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade
产品货号：BTN3280
产品规格：50μL

SYBR Green I，EG是电泳级低毒高灵敏的花青类DNA荧光染料，适用于各种核酸电泳分析。

产品特点：
1.低毒安全，其致突变性低于EB 数倍甚至数十倍。
2. 髙灵敏，SYBR Green I与dsDNA 结合，荧光信号会增强800-1000倍，至少可检出 20 pg DNA，灵敏度高于EB染色法10－25倍。
3.适用范围广，可适用于多种电泳分析，包括琼脂糖凝胶，聚*烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳等。与我司的SuperBuffer-2 兼容。
4. 不影响其它修饰酶(Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)作用。
5. 操作简单，无须脱色或冲洗。

储存条件：常低温运输，-20℃闭光保存，有效期一年。

使用方法之一：电泳前染色
 本方法是在上样时对DNA进行染色，只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 用高纯度的无水DMSO 将10000×的SYBR Green I 稀释100倍成100×电泳前染色液。染色液可以在-20℃和闭光条件下可以保存一个月以上。
2. 按常规方法制备胶，胶的厚度最好不要超过5mm，胶中不能含任何染料。
3. 将100 X电泳前染色液与DNA样品(包括DNA Marker)按1：10的比例混合，室温放置10-15分钟，加上样液后上样。
4.上样后电泳。
5.在300nm的UV下观察。UV的功率最好为90W(15W X 6)，手持UV一般功率不够，难以得到满意的灵敏度。除300nm外，SYBR Green I还可以在500nm和380nm的激发光下观察(如使用Dark Reader 蓝色可见光透色仪)。也可以用激光扫描仪记录电泳结果。
6. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。
 注意：不要使用与EB 兼容的红色滤光片(能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片，效果会更好。
7.后续Southern或Northern转膜或胶回收按常规操作进行。

使用方法之二：电泳中染色
 本方法是将SYBR Green I 加入到琼脂糖凝胶中，优点是不需要额外的染色处理，只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 将10000×SYBR Green I 直接加入到融化的、但温度已经降低到50℃左右的琼脂糖凝胶中，使其终浓度在0.5-1X左右，混合均匀后倒胶，厚度最好不要超过5 mm。
2. 按常规方法上样和电泳。
3.电泳后观察和照相处理同方法一。
 注意：由于在琼脂糖凝胶中的SYBR Green I在加热融化时会大量分解，所以琼脂糖凝胶最好需要多少配多少。

使用方法之三：电泳后染色
 本方法是在电泳后对DNA进行染色，适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE，检测灵敏度可达20 pg DNA，但该方法需要单独的染色处理。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用pH7.0-8.3的缓冲液(如：TAE，TBE或TE)将10000×SYBR Green I 稀释10000倍成1×电泳后染色液。
3. 将电泳后染色液倒入合适的聚*烯容器中，放入琼脂糖凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟。对聚*烯酰胺凝胶，可取下一块玻璃板，然后将配好的电泳后染色液轻轻地倒在PAGE胶板上，让染色液均匀地覆盖整个PAGE胶板，静置染色30分钟。避免让染色液与玻璃表面接触。
4. 观察和照相处理同方法一。
 注意：电泳后染色液可以冷冻避光储存一个星期。反复使用次数取决于胶的大小(胶越大，非特异吸附产生的损耗就越大)，一般可重复使用4次。

注意事项：
1. 融化：本产品溶于DMSO中，融化时一定要让其彻底融化，否则SYBRGreen I在液相和固相中浓度不均，影响实验的可重复性。
2. 容器：SYBR Green I 对聚*烯材料的亲和力非特意吸附最小，故建议在稀释、贮存、染色等使用过程中使用专用的聚*烯类容器，容器表面会被染成橙色。不要使用玻璃和非聚*烯容器。
3. 反复使用：由于凝胶和容器的非特意吸附，使用过的SYBR Green I 再染色时效率会逐渐降低。
4. 稳定性：稀释后的SYBR Green I工作液体最适保存条件是闭光、密封、低温(4℃)、pH在7.5-8.3。避免将本产品直接加入热的琼脂糖凝胶中，禁止用微波加热处理SYBR Green I。
5. 稀释液：可以用电泳缓冲液稀释SYBR Green I，包括常用的TAE、TBE、TE、SuperBuffer-2等。最好不要使用水和pH7.8(25℃)的Tris缓冲液。后者的pH在4℃时会升高到8.4。
6.其他影响因素：染色液中最好不要有SDS，也不要用去污剂洗涤染色用的聚*烯容器时，0.1-.3% SDS 能抑制SYBR Green I与DNA 结合。用deaza-G 替代G的DNA 不能有效染色。

疑难解答：
Q：DNA 条带为何出现弯曲或模糊？
A：DNA 过量，将DNA 用量降低到1-5 ng/条带。电泳时间不要超过2小时，否则SYBR Green I 会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。电压不能太高，否则产热会影响SYBR Green I与DNA的结合。
Q：醇/盐沉淀法能否把结合在DNA上的SYBR Green I 去掉？
A：可以。其中乙醇效果最好，*丙醇次之。但正丁*、*仿和*酚抽提不能去除与DNA 结合的SYBR Green I。
Q：用SYBR Green I 染过的胶能否用于Southern或Northern Blot？
A：可以，但最好在预杂交和杂交溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。SDS 能是SYBR Green I与DNA 分开。
Q：能否用SYBR Green I染色膜上的DNA。
A：可以用来染色带正电的尼龙膜上的DNA，不能用于中性尼龙膜和硝酸纤维素膜。

除了电泳级SYBR Green I,，我公司还供应以下相关产品：



名称：miRNA尿素-PAGE上样液
货号：BTN70608
规格：1.5mL
本品是6×的miRNA尿素-PAGE变性电泳上样液，含有RNase-free的去离子甲酰胺、RNase-free的EDTA和RNase-free的染料等。

产品特点：
1. 即开即用，不需要制备RNase-free的各种溶液。
2. 使用简单，电泳时，先将miRNA样品与本上样液1：5混合，70℃加热处理2-3分钟后，0℃冷却即可直接上样。
3.染料分子小，不会干扰mi R N A的染色。
4.跟本公司的一站式miRNA 尿素-PAGE电泳套装兼容。
5.还可以用于miRNA的琼脂糖电泳。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

名称：二甲*蓝FF溶液(电泳级)
货号：BTN100934
规格：10mL
二甲*蓝FF分子式为C25H27N2O7S2Na，分子量为554.62。CAS号为4463-44-9。 蓝黑色粉末。易溶于乙醇，溶于水呈蓝色。有刺激性。本产是二甲基蓝FF的1%水溶液，用作制备电泳上样液和生物染色剂的母液。其泳动率在0.5-1.4%琼脂糖中，与4 KbdsDNA接近。在8%变性PAGE中，相当于75bp dsDNA，在8%非变性胶中，相当于160bp dsDNA。

储存条件：常温运输及密封干燥避光保存，有效期两年。

名称：UltraStain DNA Marker
货号：WE0242
规格：100次(500μl)|500次(5×500μl)
  本产品在常规Super DNA Ladder中添加了UltraStain染料，该染料是一种生物大分子，不能穿透细胞膜进入细胞内。相对于EB的强诱变性，是一种安全无毒的核酸染料。使用本产品时，在制胶过程中无需加入EB等核酸染料，可直接将Marker上样，即可进行凝胶电泳。由于UltraStain与EB具有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置，在正常紫外光激发检测即可，使用非常方便和灵活。

自备试剂：琼脂糖；TAE/TBE电泳缓冲液(WE0216S/WE0215S)；6×UltraStain Loading Buffer(WE0211S)

实验前准备及重要注意事项：
1、进行电泳时，由于凝胶中不需要额外添加核酸染料，其他待检测的DNA样品可使用本公司的6×UltraStain Loading Buffer进行制样和电泳。
2、由于该染料无需加入到凝胶中，可使制备的凝胶保存时间更长。

操作步骤：
1．配置合适浓度的不含核酸染料琼脂糖凝胶。
2．吸取5μl本产品直接电泳于上样孔内，进行常规电泳和图像采集。



将本产品分别电泳5μl /2.5μl，在不加染料的TAE缓冲液配置的琼脂糖凝胶中的电泳图。

储存条件：2～8℃避光

名称：5×RNA上样液
货号：RFT189
规格：5×1ml

名称：强力溴化乙锭去除剂
货号：SY0248
规格：50T
强力 EB 去除剂是专用于清除溴化乙锭（EB）污染的产品，通过与EB分子中的氨基反应和断开EB分子中的含氮杂环而有效破坏EB的分子结构，清除EB的致癌性，从而实现清洁EB污染的目的。本产品可以消除EB的荧光，并使其致突变性降低99.5%以上。

适用范围广泛，可用于清除电泳缓冲液、生化溶液和固体表面的EB污染（如实验台、离心机、玻璃器皿、不锈钢制品等）。

使用简单、方便，使用强力EB去除剂将EB污染物处理后，再丢弃可以保护环境不受EB污染物影响。

注意事项

1) 溶液 A 有腐蚀性，并且操作EB 过程中为保护您的安全，请戴手套和眼罩操作。
2) 本产品暴露于空气中的时间不宜过长，使用完毕请立即密封保存于避光通风处。
3) 化学试剂配制和处理 EB 过程中可能有微量刺激有害气体产生，请在通风橱中操作。
4) 没有一种方法可以100%消除EB，因此即使处理后，应该戴手套小心操作，而不应该视为100%安全。有条件者，最好定期检测突变性，确保处理过程的正确。

操作步骤

一、各种污染溶液处理（100mL EB 污染溶液）

1.确保各种污染溶液中 EB 浓度不超过0.5mg/mL，如果浓度过高，先用水稀释到符合要求的浓度。
2.工作液准备：在通风橱，用去离子水将 2mL溶液A稀释到终体积20mL备用，将0.42g去毒剂B溶于水并定容到12mL备用。
3.将上述 20mL溶液A工作液和12mL去毒剂B工作液加入到100mL EB污染溶液中，仔细搅拌混匀（确保 pH≤3）。
4.室温放置反应 24 小时，用碳酸氢钠调节pH 到5-9。
5.用大量水将反应物冲入水槽废弃。

二、各种固体表面污染处理

1.工作液准备：在通风橱，在300mL去离子水中加入4.2g去毒剂B，充分溶解后加入20mL溶液A，仔细搅拌混匀（pH 大约为1.8）。
2.确保电器都处于断电状态后，用纸巾浸泡刚准备好的工作液，仔细将污染表面擦拭干净，重复6次，每次换用新的浸泡了工作液的纸巾，最后用浸泡了干净去离子水的纸巾擦拭干净工作液，收集纸巾到一个指定处理用容器中。工作液pH 值为1.8，有轻微腐蚀性，不宜用来擦拭耐受力弱的物品，可改用去离子水浸泡的纸巾擦拭。擦拭前可用紫外灯帮助发现污染区，擦拭后帮助确认已经擦拭干净。
3.将这些污染纸巾浸泡在工作液中至少室温放置一个小时，用碳酸氢钠调节pH到5-9后，液体用大量水冲入水槽，纸巾入垃圾堆。

运输与保存方法：冰袋运输。溶液A于-20℃保存，去除剂B于4℃保存。12个月内有效。