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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
823
- 英文名:
SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常低温运输,-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应电泳级SYBR Green I优惠价,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:电泳级SYBR Green I优惠价
英文名:SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade
规格:50μL
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
SYBR Green I,EG是电泳级低毒高灵敏的花青类DNA荧光染料,适用于各种核酸电泳分析。
产品特点:
1.低毒安全,其致突变性低于EB 数倍甚至数十倍。
2. 髙灵敏,SYBR Green I与dsDNA 结合,荧光信号会增强800-1000倍,至少可检出 20 pg DNA,灵敏度高于EB染色法10-25倍。
3.适用范围广,可适用于多种电泳分析,包括琼脂糖凝胶,聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳和毛细管电泳等。与我司的SuperBuffer-2 兼容。
4. 不影响其它修饰酶(Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)作用。
5. 操作简单,无须脱色或冲洗。
储存条件:常低温运输,-20℃闭光保存,有效期一年。
使用方法之一:电泳前染色
本方法是在上样时对DNA进行染色,只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 用高纯度的无水DMSO 将10000×的SYBR Green I 稀释100倍成100×电泳前染色液。染色液可以在-20℃和闭光条件下可以保存一个月以上。
2. 按常规方法制备胶,胶的厚度最好不要超过5mm,胶中不能含任何染料。
3. 将100 X电泳前染色液与DNA样品(包括DNA Marker)按1:10的比例混合,室温放置10-15分钟,加上样液后上样。
4.上样后电泳。
5.在300nm的UV下观察。UV的功率最好为90W(15W X 6),手持UV一般功率不够,难以得到满意的灵敏度。除300nm外,SYBR Green I还可以在500nm和380nm的激发光下观察(如使用Dark Reader 蓝色可见光透色仪)。也可以用激光扫描仪记录电泳结果。
6. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。
注意:不要使用与EB 兼容的红色滤光片(能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片,效果会更好。
7.后续Southern或Northern转膜或胶回收按常规操作进行。
使用方法之二:电泳中染色
本方法是将SYBR Green I 加入到琼脂糖凝胶中,优点是不需要额外的染色处理,只适于琼脂糖凝胶电泳。
1. 将10000×SYBR Green I 直接加入到融化的、但温度已经降低到50℃左右的琼脂糖凝胶中,使其终浓度在0.5-1X左右,混合均匀后倒胶,厚度最好不要超过5 mm。
2. 按常规方法上样和电泳。
3.电泳后观察和照相处理同方法一。
注意:由于在琼脂糖凝胶中的SYBR Green I在加热融化时会大量分解,所以琼脂糖凝胶最好需要多少配多少。
使用方法之三:电泳后染色
本方法是在电泳后对DNA进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE,检测灵敏度可达20 pg DNA,但该方法需要单独的染色处理。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用pH7.0-8.3的缓冲液(如:TAE,TBE或TE)将10000×SYBR Green I 稀释10000倍成1×电泳后染色液。
3. 将电泳后染色液倒入合适的聚丙*(代"烯")容器中,放入琼脂糖凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟。对聚丙*(代"烯")酰胺凝胶,可取下一块玻璃板,然后将配好的电泳后染色液轻轻地倒在PAGE胶板上,让染色液均匀地覆盖整个PAGE胶板,静置染色30分钟。避免让染色液与玻璃表面接触。
4. 观察和照相处理同方法一。
注意:电泳后染色液可以冷冻避光储存一个星期。反复使用次数取决于胶的大小(胶越大,非特异吸附产生的损耗就越大),一般可重复使用4次。
注意事项:
1. 融化:本产品溶于DMSO中,融化时一定要让其彻底融化,否则SYBRGreen I在液相和固相中浓度不均,影响实验的可重复性。
2. 容器:SYBR Green I 对聚丙*(代"烯")材料的亲和力非特意吸附最小,故建议在稀释、贮存、染色等使用过程中使用专用的聚丙*(代"烯")类容器,容器表面会被染成橙色。不要使用玻璃和非聚丙*(代"烯")容器。
3. 反复使用:由于凝胶和容器的非特意吸附,使用过的SYBR Green I 再染色时效率会逐渐降低。
4. 稳定性:稀释后的SYBR Green I工作液体最适保存条件是闭光、密封、低温(4℃)、pH在7.5-8.3。避免将本产品直接加入热的琼脂糖凝胶中,禁止用微波加热处理SYBR Green I。
5. 稀释液:可以用电泳缓冲液稀释SYBR Green I,包括常用的TAE、TBE、TE、SuperBuffer-2等。最好不要使用水和pH7.8(25℃)的Tris缓冲液。后者的pH在4℃时会升高到8.4。
6.其他影响因素:染色液中最好不要有SDS,也不要用去污剂洗涤染色用的聚丙*(代"烯")容器时,0.1-.3% SDS 能抑制SYBR Green I与DNA 结合。用deaza-G 替代G的DNA 不能有效染色。
疑难解答:
Q:DNA 条带为何出现弯曲或模糊?
A:DNA 过量,将DNA 用量降低到1-5 ng/条带。电泳时间不要超过2小时,否则SYBR Green I 会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。电压不能太高,否则产热会影响SYBR Green I与DNA的结合。
Q:醇/盐沉淀法能否把结合在DNA上的SYBR Green I 去掉?
A:可以。其中乙醇效果最好,异丙醇次之。但正丁醇、*仿和*酚抽提不能去除与DNA 结合的SYBR Green I。
Q:用SYBR Green I 染过的胶能否用于Southern或Northern Blot?
A:可以,但最好在预杂交和杂交溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。SDS 能是SYBR Green I与DNA 分开。
Q:能否用SYBR Green I染色膜上的DNA。
A:可以用来染色带正电的尼龙膜上的DNA,不能用于中性尼龙膜和硝酸纤维素膜。
我公司的电泳级SYBR Green I优惠价,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·柱式DNA污染清除剂(大处理量)
编号:BTN90802
英文名称:Maxi Column DNA Scavenger
规格:5次
本品是柱式DNA清除剂(BTN90318)的大提升级产品,可用于细胞总RNA样品中基因组DNA污染的去除。目前最常用的RNase-free DNase处理方法因DNase中所含残留的RNase能破坏RNA完整性而具有很大缺陷。本公司开发的大提柱式非酶DNA清除剂不但彻底避免了RNase-free DNase的这一缺陷,同时还具有下列特点。
产品特点:
1.处理量大,一次可以处理高达400μg的总RNA。
2. 操作简单快速,全部操作只需要十余分钟。
3. 回收率高达80%以上。
4.高效,能使总RNA中的基因组DNA污染降低到电泳检测不到的水平,而 RNA分子完整性不受任何影响。
5. 本身不含RNase污染,避免了用DNase处理的最大问题。
6. 稳定,本产品为非酶产品,可以常温运输和4℃长期保存;而RNase-free DNase的运输和长期保存必须在低温进行。
7. 性价比高,单位成本远低于RNase-free DNase。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 5ml |
| 溶液B | 100ml |
| 大提离心吸附柱 | 5套 |
| 通用洗柱液 | 100ml |
| RNA洗脱液 | 5ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输、除溶液A 需要 4℃保存外其余均可室温保存、有效期一年。
使用方法:
1. 将1mL 总 RNA溶液与1mL溶液A 加入一个自备的30-50mL塑料离 心管中,并充分震荡 1分钟。注意:RNA溶液中盐(如*离子)的浓度 不能高于0.2 M,如果 RNA溶液的量不足 1mL,最好加自备的无 RNase 水补足到 1mL以便后续操作。
2. 加入9倍体积(即 18mL)的溶液B,颠倒数次充分混匀。注意:溶液B在 4℃放置后可能会产生沉淀,用前需检查,如果确实有沉淀,必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将混合液转移到离心吸附柱中,室温 5000-7000rpm离心一分钟,弃穿透液。
4. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温 5000-7000rpm离心一分钟,弃穿透液。
5.一次洗涤一般足够去除杂质。如果有必要,可以再加 10mL 通用洗柱液 到离心吸附柱中,室温 5000-7000rpm离心一分钟,弃穿透液。一般 情况,此步可以省略。
6.室温 5000-7000rpm离心一分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗 柱液会影响 RNA的使用。
7. 将离心吸附柱转移到一个新的自备的50mL塑料离心管中,加入0.5mL RNA 洗脱液,室温放置 1-2分钟。室温 5000-7000rpm离心一分钟,离心管中溶液即为RNA样品。
8. 由于离心吸附柱吸附能力强,还有大量 RNA 吸附在柱上,所以还需要加 入0.5mL RNA 洗脱液,室温放置 1-2分钟。室温 5000-7000rpm离 心一分钟。
9. 两次收集的1mL RNA样品,可以立即使用,也可以存放于-80℃待用。
疑难解答:
Q:能否用本产品对同一样品进行反复处理?
A:可以。
Q:本产品跟 DNA Scavenger-2有何区别?
A:本产品为柱式升级产品,比 DNA Scavenger-2 更快速清除 RNA样品中的DNA污染。
电泳级SYBR Green I优惠价关键词:BTN3280,电泳级SYBR Green I,SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade
·大肠杆菌HB101化学感受态细胞
编号:BTN81221
英文名称:E.coli HB101 Chemical Competent Cell
规格:0.1mL*10
HB101菌株是E.coli K12菌株与E.coli B菌株的杂合产物(同时也是Stbl3的原始菌株)。recA13突变可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。hsdS20 背景使HB101缺失内切酶系统,增强了外源DNA的稳定性和提取质量。本产品是采用大肠杆菌HB101特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。
产品特点:
1. 具有链霉素抗性。
2.基因型:F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-)recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR)glnV44λ-。
3. 不存在 lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。
4. 该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞处于冰水混合状态时,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μL感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟,晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入450μL 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含有相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃倒置培养12-16小时。
注意事项:
1. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
2. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(5000rpm,1分钟)收菌后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
3. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
4. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
电泳级SYBR Green I优惠价关键词:BTN3280,电泳级SYBR Green I,SYBR GreenⅠ, electrophoretic grade
·PLP固定液(Nakane-McLean固定液)
编号:BTN131289
英文名称:Periodate-Lysine-Paraformaldehyde Fixative Solution
规格:250mL
PLP固定液即过碘酸*-赖*酸-多聚甲醛固定液,又可称为Nakane-McLean固定液。该固定液的作用机制是借助于过碘酸氧化组织中的糖类形成醛基,通过赖*酸的双价*基与醛基结合,从而与糖形成交联。由于组织抗原绝大多数都是由蛋白质和糖两部分构成,抗原决定簇位于蛋白部分,故该固定液有选择性地使糖类固定,这样既稳定了抗原,又不影响其在组织中的位置关系。
产品特点:
1.较适于富含糖类的组织,对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
2.即开即用,用户不需单独购买各种试剂来配制。
3.固定时间一般需要12-24小时。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 240ml |
| 溶液B | 80ml |
| 成分C | 1g |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃避光保存,保存期限半年。
使用方法:
一、配制PLP 固定液(以配制50mL 固定液工作液为例,如果用户需要配制其他体积,请按比例增加或减少各成分的用量)
1.取 30mL溶液A加入到50mL的聚乙*(代"烯")离心管中。
2.继续向离心管中加入10mL的溶液B,混合均匀。
3.称取 0.085g成分C的干粉,加入到上步混合液中,搅拌直至干粉溶解,即得到PLP固定液工作液。
注:此固定液最好临用前配制,否则时间长了会产生一些沉淀,亦会发生氧化反应,从而影响后续组织固定实验。
二、固定液的使用(以皮肤活组织切片为例)
4.取皮肤活组织,切成小长方块。
5.置入PLP 固定液工作液中,固定12-24小时(根据样品材料、大小不同,固定时间或固定温度可能会有较大差异)。
6.用 0.1 M自备的PBS溶液漂洗固定后的组织样品。
7.将样品置于自备的20%甘油或0.1 M PBS溶液中,4℃下保存过夜。
8.将上述样品转移至-20℃下保存备用(20%甘油或0.1 M PBS溶液应淹没组织样品,以防组织样品暴露在液面外被冻伤),或用冷冻的滑动式切片机将固定后的组织样品切成薄片,光镜或电镜下观察组织。
注意事项:
1.本产品对人体有一定的损害,请在通风好的环境下小心操作,避免吸入。
2.组织取材的厚度不同,固定时间也不同,对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
3.固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
4.固定后的组织样品在转移到-20℃下保存之前,4℃下最长可保存1周。
5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
北京百莱博科技有限公司专业生产核酸电泳和回收产品,欢迎来电咨询选购电泳级SYBR Green I优惠价。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
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REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
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