溶酶体蛋白提取试剂盒

特别提示：包括溶酶体蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：溶酶体蛋白提取试剂盒
英文名称：Lysosome Protein Extraction Kit
产品货号：HR8006
产品规格：50T/100T

溶酶体是由一层单位膜包围，内含多种酸性水解酶的泡状结构。溶酶体含有40 多种水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是对细胞内物质的消化作用。此外溶酶体与器官形成、激素分泌的调节以及某些疾病的发生密切相关。
溶酶体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的溶酶体蛋白提取。适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取溶酶体总蛋白。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(相关产品HR0389)。
我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒，专用于蛋白质谱检测的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
【注】：
●蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
●蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照试剂盒中随产品附带的印刷版说明书，不能参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
技术支持：产品技术问题可发邮件至hhsky1017@163.com咨询。如果您有任何关于产品性能或者新应用和技术的建议，欢迎您随时联系我们。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
● 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
● 提取过程简单方便。
●含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
● 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
● 总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
●蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
●离心机● 振荡器● 涡旋混匀器● Dounce匀浆器● 移液器●冰箱●冰盒
试剂：
● PBS (pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1×))(phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
耗材：
●离心管● 吸头

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 最好使用Dounce 匀浆器匀浆，如果没有Dounce 匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是溶酶体蛋白回收率会下降。
● 若实验室离心机较小达不到30000g离心力，或者离心管质量不能承受30000g离心力，请使用能达到的最大离心力。
提取液准备：
每200μl冷的蛋白提取液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
细胞溶酶体蛋白提取：
1．取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2．用冷PBS 洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3．加入500μl-1000μl冷的试剂A，置冰上振荡10分钟。
4．用Dounce 匀浆器匀浆30-40 下。
5.在4℃，1000g 力条件下离心5分钟，弃沉淀，留上清。
6．将上清在4℃，4000g 力条件下离心10分钟，弃沉淀，留上清。
7．将上清在4℃，20000g 力条件下离心20分钟，弃上清，留沉淀。
8.在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
9.在4℃，20000g 力条件下离心20分钟，弃上清，留沉淀。
10.在沉淀中加入100-200μl蛋白提取液C，充分混匀。
11．轻微振荡15-30分钟。
【注】：
●用振荡器或脱色摇床/平板摇床较低转速，保持液体有轻微的晃动即可。
● 没有2-8℃振荡条件时室温振荡即可。
● 没有振荡条件时也可不振荡，稍微延长提取液C 处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
12.在4℃，12000g条件下离心15分钟。
13．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到溶酶体总蛋白。
14．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织溶酶体蛋白提取：
1．取50-100mg 新鲜动物组织样本，用PBS 洗涤干净。
2．用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS 洗涤两次。
3．加入500μl-1000μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
4．用Dounce 匀浆器匀浆30-40 下，至无明显可见固体。
5.在4℃，1000g 力条件下离心5分钟，弃沉淀，留上清。
6．将上清在4℃，4000g 力条件下离心10分钟，弃沉淀，留上清。
7．将上清在4℃，20000g 力条件下离心20分钟，弃上清，留沉淀。
8.在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
9.在4℃，20000g 力条件下离心20分钟，弃上清，留沉淀。
10.在沉淀中加入100-200μl蛋白提取液C，充分混匀。
11．轻微振荡15-30分钟。
【注】：
●用振荡器或脱色摇床/平板摇床保持液体有轻微的晃动即可。
● 没有2-8℃振荡条件时室温振荡即可。
● 没有振荡条件时也可不振荡，稍微延长提取液C 处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
12.在4℃，12000g条件下离心15分钟。
13．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到溶酶体总蛋白。
14．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
溶酶体蛋白丰度较低，需要足够的样品量才能得到足够的蛋白，在条件允许的情况下，适当增加细胞或组织样本的上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂C中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

除了溶酶体蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：


YT035 蛋白标准(5mg/ml BSA) 1ml
WE0289 SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×) 5×2ml
SNM450 蛋白示踪上样缓冲液(非还原，5×) 5ml
SNM453 蛋白上样缓冲液(还原，5X) 10ml
KFS024 成心肌鉴定cTnI免疫组化试剂盒(IHC) 50T
KFS027 成神经细胞鉴定NF/NSE免疫荧光试剂盒(IF) 50T
KFS037 Cy3标记抗山羊免疫荧光染色试剂盒 300T
KFS078 40% Acr-Bis (39:1) 100ml
KFS214 Akt蛋白检测试剂盒 50T
SY0390 牛纤维蛋白原 1g
QN1227 SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC显色) 100T-200T
HR0079 血液单核细胞蛋白提取试剂盒 50T/100T
HR8012 核蛋白提取试剂盒(无去垢剂) 50T/100T
HR0177 植物膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用) 50T/100T
HR8055 植物核蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用) 50T/100T
HR8066 酵母蛋白提取试剂盒(无去垢剂) 50T/100T
HR0307 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 100mg/500mg
HR8159 3.5KD透析袋(φ6mm) 1卷，5M
MT0076 超敏ECL发光液 50ml|500ml
GL2515 乙醇酸氧化酶(GO)提取液 2×500ml
GL1502 常规考马斯亮蓝染色液 100ml|500ml