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- 2026年05月28日
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2-8℃
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一年
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大量
- 供应商：
贝博生物
- 规格：
50T/100 T
| 规格： | 50T | 产品价格： | ￥700.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100 T | 产品价格： | ￥1200.0 |
溶酶体是由一层单位膜包围，内含多种酸性水解酶的泡状结构。溶酶体含有40多种水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是对细胞内物质的消化作用。此外溶酶体与器官形成、激素分泌的调节以及某些疾病的发生密切相关。 贝博® BBproExtra® 溶酶体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的溶酶体蛋白提取。适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取溶酶体总蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
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文献和实验提取液准备：
每200ul冷的蛋白提取液C中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
细胞溶酶体蛋白提取：
1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 加入500μl-1000ul冷的试剂 A，置冰上振荡10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。
5. 在4℃，1000×g力条件下离心5分钟，弃沉淀，留上清。
6. 将上清在4℃，4000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，留上清。
7. 将上清在4℃，20000×g力条件下离心20分钟，弃上清，留沉淀。
8. 在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
9. 在4℃，20000×g力条件下离心20分钟，弃上清，留沉淀。
10. 在沉淀中加入100-200ul蛋白提取液C，充分混匀。
11. 轻微振荡15-30分钟。
12. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
13. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到溶酶体总蛋白。
14. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织溶酶体蛋白提取：
1. 取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
2. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 加入500μl-1000ul冷的试剂 A，置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下，至无明显可见固体。
5. 在4℃，1000×g力条件下离心5分钟，弃沉淀，留上清。
6. 将上清在4℃，4000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，留上清。
7. 将上清在4℃，20000×g力条件下离心20分钟，弃上清，留沉淀。
8. 在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
9. 在4℃，20000×g力条件下离心20分钟，弃上清，留沉淀。
10. 在沉淀中加入100-200ul蛋白提取液C，充分混匀。
11. 轻微振荡15-30分钟。
12. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
13. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到溶酶体总蛋白。
14. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
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