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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温
- 供应商:
臻诺生物
- 规格:
20 tests
凯基 KGA1311 cDNA 第一链合成试剂盒(AMV)
货号:KGA1311(50T);KGA1312(20T);KGA1313(100T),科研用途,不可临床诊断核心酶为单品 KGEA02 AMV 反转录酶(自带 RNase H 活性),全套组分配齐,含 β‑actin 阳性对照引物,适合普通 RT‑PCR、基因表达检测,不适合超长 cDNA 合成凯基生物。
核心特性
- AMV 反转录酶,具备RNA 依赖 DNA 聚合酶、DNA 依赖 DNA 聚合酶、RNase H 三重活性凯基生物
- 耐受 RNA 二级结构,最适温度 42‑45℃;RNase H 会降解 RNA‑cDNA 杂合链,推荐合成≤5‑6 kb 中短片段 cDNA
- 试剂盒配齐 Oligo dT₁₈、随机引物、dNTP、DTT、RNase 抑制剂,自带 β‑actin 引物作为 PCR 阳性对照,方便实验结果验证凯基生物
- 无 DNase、无 RNase 污染;产物适用于 RT‑PCR、基因表达分析、引物延伸、cDNA 探针标记
试剂盒组分(KGA1311,50 次,20 μL 反应体系)凯基生物
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文献和实验通过体外无细胞系统翻译找出目的基因mRNA以后,变可进行cDNA第一链的合成,其步骤包括: 1)在Ependorf管中加50pmol/L的一种α32PdNTP和1mg/ml的mRNA 10μl(10μg),100m mol/L甲基氢氧化汞1μl,室温反应l0分钟,使RNA变性。 2)加100m mol/L的β-巯基乙醇2μl和10m mol/L RNA酶抑制剂2μl,室温放置5分钟。β-巯基乙醇有稳定逆转录酶活性的作用。 3)向上述反应混合物加lmg/ml
M-MLV第一链cDNA合成试剂盒-技术手册一、 试剂盒组成 Components SK2027 SK2028 5×M-MLV Reaction Buffer 100µl
cDNA,产生 cDNA:RNA 复合物。该过程被称为第一链 cDNA 合成。如果存在 RNase H 活性(如野生型 AMV 和 MMLV 反转录酶),则 cDNA:RNA 复合物中的 RNA 会在第一链合成期间被切割。第一链 cDNA 可以直接用于 RT-PCR 等实验应用中,热稳定 DNA 聚合酶(如 Taq DNA 聚合酶)将复制 cDNA 的互补链。 在 cDNA 文库构建和测序中,将第一链 cDNA 作为模板,获得代表 RNA 靶标的双链 cDNA。这个过程被称为第二链cDNA 合成
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