死细胞核7-AAD染料

Annexin V 凋亡试剂盒常见问题

Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD

流式结果容易出现「假阳性」怎么办？多年经验总结来啦

细胞术是通过检测不同荧光染料发射光谱来判断细胞是否发生凋亡。 由于光的发射波长不是一个具体值而是一个范围，所以会存在发射光谱「重叠」的现象，此时单个通道内可能检测出多个荧光基团的荧光从而造成「假阳性」现象，因此必须通过补偿进行修正，以确保所检测的荧光来自单一的荧光染料。 举个例子：PE 和 FITC 这两个通道是检测细胞凋亡时经常使用的通道，我们就拿这个作为例子说明为什么需要调节补偿。 如下图所示，浅绿色和浅黄色部分分别代表 FITC 和 PE 发射波长范围，深绿色和深黄

3D 活/死细胞测定的分析工作流程

，然后第二天用 NucView 550 (Biotium) 施用不同浓度的星形孢菌素（STS）。NucView 550 是 caspase-3 荧光探针，死细胞核用红色荧光染色。用 STS 和 NucView 550 处理后，将 HT-29 微球用 4% 多聚甲醛固定并用 0.5%Triton X-100 / PBS（-）通透性处理。微球的细胞核在 4°C（39.2°F）下用 Hoechst 33342 过夜染色。染色后，用 SCALEVIEW-S4 将微球透明化。   成像和分析 我们使用 FV