DAB显色液（固体装）

石蜡切片免疫组化实验步骤

性笔在组织周围画圈，然后滴加稀释好的一抗，如果做阴性对照实验，就在对照组的组织上滴加 PBS。加完一抗后于 4 °C湿盒中孵育过夜。（抗体的最佳稀释比应预先通过实验确定，时间控制在 15h 以上）。 PBS 冲洗切片 3 次，每次 3 min，吸水纸擦干切片后滴加辣根过氧化物酶标记二抗 ，37 ℃ 孵育 30 min。 信号检测 PBS 冲洗切片 4 次，每次 3 min，甩去 PBS 液体后吸水纸擦干切片，每张切片滴加新鲜配制的 DAB 显色液，显微镜下观察，阳性信号为棕黄色或棕褐色，时间

免疫组化常见十大问题与解析

修复时，需等待液体缓慢恢复至室温。 （5）冰冻切片未进行复温：冰冻切片应先于室温放置到复温后再浸泡至PBS中。 Q9：染色强度不均匀怎么办？ （1）切片厚度不均匀：切片的厚薄不一，可能导致染色呈现一边强，一边弱的情况。 （2）DAB 染色液未混匀：DAB 在样本上的浓度不一致，导致染色不均匀，加完显色液后最好将片子来回左右晃动几下，使片子上所有区域的底物浓度一致。 （3）试剂未完全覆盖样本：边缘易由于未覆盖而导致无染色或弱染色。免疫组化笔画圈应距组织边缘大于 3～4 mm，试剂要充分覆盖组织，应超出

我的石蜡切片又「团灭」了！没关系，专业技术人员与您并肩推塔！

滴加于切片上，室温孵育40 min。16. 洗涤：切片浸没于TBST中，3 ×5 min。17. 配置显色液：将一滴SignalStain® DAB Chromogen Concentrate（约30ul）加入1 mL SignalStain® DAB Diluent中，混匀。18. 将显色液滴加于切片上，于显微镜（10倍目镜）下观察染色情况，待看到棕黄色阳性沉积，且背景不深时，将切片浸没于ddH2O中，终止染色。19. 按实验室常规步骤复染核、封片。测试结果使用PD-L2的阳性对照切片