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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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540
- 英文名：
M-MLV reverse transcriptase II (RNase H-)
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
特别提示：包括M-MLV反转录酶II(RNase H-)(逆转录酶)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：M-MLV反转录酶II(RNase H-)(逆转录酶)
英文名称：M-MLV reverse transcriptase II (RNase H-)
产品规格：2000U|10KU|50KU
本品是一种经过改造和优化的M-MLV反转录酶，具有正常的依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性，能够以RNA或DNA为模板，在引物存在的情况下进行互补DNA链的合成，即可以进行cDNA(complementary DNA)的第一链合成。
本产品是最常用的反转录酶之一，广泛用于获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成，后续可以用于PCR、real-time PCR也称定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建等。本品还可以通过反转录用于DNA探针的荧光、生物素、Digoxin或同位素标记等，也可以通过引物延伸(primer extention)来分析和研究RNA。
本产品无RNase H活性，反转录效率高、产物长度长。本产品与野生型M-MLV反转录酶相比，无RNase H活性，不能选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，从而有助于高效合成长度更长的cDNA。本产品经测试可以轻松完成长度为8 kb及以下基因的反转录(参考图1)，反转录的最大长度可以超过10kb。
使用本品反转录总RNA后，对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见对于0.2-8kb的cDNA可以非常高效地被反转录。
本产品热稳定性高。最适反应温度为42-45℃，但当温度达到50℃时仍具有很高活性，且可获得较高产量的cDNA。
在不同温度下的反转录效果。用从NIH3T3细胞抽提获得的总RNA 500 ng，在20μl的反转录体系中按照图中所示温度进行反转录。反转录完成后取1μl反转录产品进行目的基因的PCR扩增和电泳。
本品是一种大肠杆菌重组高表达的的反转录酶，由于其表达量非常高，大大提高了本产品的性价比。本反转录酶含有从Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase基因克隆的缺失RNase H domain的pol基因，并进行了突变优化以提高其热稳定性、反转录效率和表达量。
酶活性定义：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTTP into acid-precipitable material in 10 min at 37℃ using poly(A)·oligo(dT) 12-18 as template-primer。反应体系为 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 10 mM DTT, 0.5mM [3H]-dTTP and 0.4 mM polyA·oligo(dT)12-18。
纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。
酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.01% NP-40 and 50% glycerol。
失活或抑制：80℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚*(polyamine)对M-MLV反转录酶(RNase H-)有抑制作用。
本产品中M-MLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200U/μl，用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。
储存条件：-20℃。
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文献和实验，可用于确定 cDNA 5'和3'末端的未知序列。通常，这些方法分别被称为 5' RACE和 3' RACE。 在 5'RACE中，任何长度的（甚至包括未到达mRNA 5'末端的）第一链 cDNA 都将具有添加序列（即同聚物尾部结构或接头），随后通过 PCR 进行扩增。为了最大化全长 cDNA 的合成，应选择具有最小 RNA 酶 H 活性、高持续合成能力和高热稳定性的逆转录酶。 在 3'RACE 中，全长 cDNA 并不重要，因为不会扩增 PCR 起始位点的上游序列。但是，最好选用可生成长 cDNA
50µl M-MLV Reverse Transcriptase (b) (200U/µl) 4000U 10000U RNase-free ddH2 O 1ml
又称 RNA指导的 DNA聚合酶。是以 RNA为模板合成 DNA的酶。这种酶是 1970年美国科学家特明（ H.M.Temin）和巴尔的摩（ D.Baltimore）分别于动物致癌 RNA病毒中发现的，他们并因此获得 1975年度诺贝尔生理学或医学奖。当 RNA致癌病毒，如鸟类劳氏肉瘤病毒（ Rous sar-coma virus）进入宿主细胞后，其逆转录酶先催化合成与病毒 RNA互补的 DNA单链，继而复制出双螺旋 DNA，并经另一种病毒酶的作用整合到宿主的染色
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