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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
449
- 英文名:
3,4,3',4'-Tetraaminodiphenyl;DAB
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
−20℃
- 规格:
1g|5g
特别提示:包括DAB(HRP显色底物)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:DAB(HRP显色底物)
英文名称:3,4,3",4"-Tetraaminodiphenyl;DAB
产品货号:QN1149
产品规格:1g|5g
本品常用作HRP显色的底物
别名:3,3’-二氨基联**四盐酸
CAS号:868272-85-9
分子式:C12H14N4·4HCl·xH2O
分子量:360.1
纯度:>98.0
性状:淡粉色到淡紫色结晶
储存条件:−20℃
除了DAB(HRP显色底物),3,3’-二氨基联**四盐酸,我公司还供应以下相关产品:
名称:胆酸钠
货号:BTN131048
规格:5g
本产品用于制备脂质体和分离脂质。HPLC测定其纯度>99%。低紫外吸收(1%溶液的A280<0.08)。可以重生固定化的多粘菌素B 亲和柱。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
名称:微量蛋白沉淀试剂盒
货号:BTN81217
规格:50次
本产品用于微量沉淀浓缩蛋白质样品,其原理是通过酸使蛋白质变性,溶解度降低,在离心条件下沉淀,而达到蛋白变性、蛋白浓缩、蛋白去盐的目的。他们还有一个重要的用途是去除污染的盐离子和其他小分子。
产品特点:
1. 操作方便迅速,只需要混匀后离心,不需要其他仪器。
2.产品稳定,可室温长期放置。
3.可以处理各种液体样品(如细胞或细菌培养物,细胞裂解物,蛋白质提取物等等)。
4.浓缩效果强,可浓缩浓度低达1μg/mL的蛋白。
5.可用于含SDS的样品,但灵敏度稍低(5μg/mL)。
6. 得到的蛋白质可用于后续的SDS-PAGE、免疫沉淀和质谱分析等实验。但蛋白已经变性,没有活性。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 0.5ml |
| 溶液B | 1ml |
| 溶液C | 50ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法一:用于不含SDS的样品,但样品蛋白浓度不能低于1μg/mL
1、将100μL需要沉淀浓缩的蛋白样品转移到一个自备的1.5mL塑料离心管中。
2、加入10μL溶液A,涡旋激烈震荡10-30秒混匀。
3、冰上放置15分钟。
4、加入10μL溶液B,轻轻混匀。
5、冰上放置60分钟。
6、4℃12000~15000×g离心10分钟。
7、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。
8、加入1mL 冰浴的溶液C,震荡混匀后4℃12000~15000×g离心15分钟。
9、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。
10、短暂离心,小心移弃残留上清液后,将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上,空气晾干。一般需要10分钟左右。
11、样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀,取适量上样。如果蓝色的溴酚蓝染料变黄,则说明有残留酸性物质TCA污染,必须加少量自备的1M Tris-HCl(pH8.8)缓冲液,直到颜色变成蓝色为止,否则将影响电泳结果。
使用方法二:用于含SDS的样品,但样品蛋白浓度不能低于5μg/mL
1、将200μL需要沉淀浓缩的蛋白样品(浓度不低于5μg/mL)转移到一个自备的1.5mL塑料离心管中。
2、加入8μl溶液B,涡旋激烈震荡10-30秒混匀。
3、冰上放置30分钟或-20℃放置15分钟(过夜放置更好)。
4、4℃ 12000~15000×g离心15分钟。
5、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。
6、加入1mL冰浴的溶液C,震荡混匀后4℃ 12000~15000×g离心15分钟。
7、小心移弃上清液,保留蛋白沉淀。
8、短暂离心,小心移弃残留上清液后,将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上,空气晾干。一般需要10分钟左右。
9、样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀,取适量上样。如果蓝色的溴酚蓝染料变黄,则说明有残留酸性物质TCA污染,必须加少量自备的1M Tris-HCl(pH8.8)缓冲液,直到颜色变成蓝色为止,否则将影响电泳结果。
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文献和实验底物范围较广,包括二氨基联苯胺 (DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。 二氨基联苯胺/金属盐 DAB 是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在 DAB 中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色,且在水及醇中稳定。DAB/金属盐染色应用的组织染色范围较广。 1. 需要的溶液和特殊设备 DAB,0.05 mol/L Tris 缓冲液 (pH7.6), 0.3% (W
化物酶,然后用PBS洗涤三次,每次 5min。4 ) 加入一抗(用3%BSA-PBS封闭液1:50稀释一抗),37℃湿盒孵育1h。5 ) 加入Post-blocking室温湿盒孵育30min,然后用PBS洗涤三次,每次5min。6 ) 加入稀释好的辣根过氧化物酶(HRP)标二抗,室温下湿盒孵育30min。7 ) 用PBS洗涤玻片5次,每次5min。8 ) 按照DAB试剂盒说明添加显色液,避光显色30s-5min。用蒸馏水终止显色反应。9 ) 苏木精进行复染色3min,用蒸馏水冲洗。10
显色(HRP酶) 1.增强化学发光法(ECL) Ecl 显色原理:氨基苯二酰肼类主要是鲁米诺及异鲁米诺衍生物,是最常用的一类化学发光剂。鲁米诺(luminol,5'-氨基-2,3-二氢-1,4-酞嗪二酮)的分子结构及化学反应式如下: 鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物,也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中,含有H2O2和鲁米诺,在HRP(辣根过氧化物酶)的作用下,发出荧光来。 试验步骤: 1)将两种显色底物1:1等体积混合(一般各1ml/membrane)。
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