体液病毒DNA/RNA小量制备试剂盒

体液病毒DNA/RNA小量制备试剂盒
产品概述：
储存条件
Buffer V-L: 病毒裂解液，室温密闭贮存。
Buffer V-N: 蛋白去除液，室温密闭贮存 。
BufferW1A: 洗涤液，使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇），混合均匀温室密闭贮存。
Buffer W2 concentrate: 去盐液，使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇），混合均匀，室温密闭贮存。

Buffer TE (nuclease-free): 5mM Tris-HCI. 0.1 mM EDTA, pH8.5。无DNA/RNA酶活性，室温密闭贮存。



流程图

常见问题解答：

◆PCR或者RT-PCR扩增多条带/片段大小不对
考虑操作环境中的污染，如试剂、塑料耗材等。做一个阴性对照，确定扩增出有正确条带的多带污染的来源（塑料/试剂）。

◆PCR扩增不出
·引物、试剂或者是退火温度等设置的问题
做质控，确认原因。
·忘记在Buffer W2中加乙醇。
确认加入的是100%乙醇或者95%乙醇。如果对Buffer W2有疑问 ，可以用70%乙醇临时代替检验结果。
·病毒滴度低
尽量提高病毒的使用量，重新PCR。增加PCR循环数。设置阳性质控。
·病毒DNA降解
由于病毒在生物样本中的含量往往很低，并且处理要很小心。在操作时尽量去除可能影响病毒得率的污染源。

◆RT-PCR扩增不出条带
·病毒滴度低
尽量提高RNA病毒的量，重新RT-PCR。提高RT-PCR循环数。设置阳性质控。
·RNA病毒降解
由于病毒在生物样本中的含量往往很低，并且处理要很小心。在操作时尽量去除可能影响病毒得率的污染源。比如使用经过DEPC处理过的材料。加入RNasin（1unit/ul）到纯化好的RNA病毒中也可以提高RNA的稳定性。
·引物、试剂或者是退火温度等设备问题

◆病毒DNA/RNA产量低或没有DNA/RNA洗脱下来
·高水平的RNA酶活性导致RNA降解
严格按照RNA提取注意事项创造无DNA/RNA酶环境，得到的DNA/RNA产物应该立刻使用或者保存在-80℃。
·蛋白酶K失效或者消化不完全
收到蛋白酶K后，充分溶解，按照每次使用量分装冻存，避免反复冻融。
·DNA/RNA仍在柱子上。
重复洗脱。
洗脱前将DEPC水预热到70℃。
离心前将DEPC水加入柱子膜中央，使洗脱液完全浸润制备膜，并静置5min。
·柱子吸附量超载。
减少加入柱子中的样品量。
增加蛋白酶K消化时间。
·Buffer W2中未加无水乙醇。
检查试剂瓶标签并在Buffer W2中加入正确体积的无水乙醇。

◆DNA/RNA降解
·样本有问题。
样品应该保存在液氮或者-80℃直到使用，不能反复冻融。
严格按照操作说明书快速提取RNA。
样本本身病毒RNA含量低。
·DNA/RNA酶污染
严格按照RNA提取注意事项创造无RNA酶环境，确保在操作中未引入RNA酶。
检查溶液是否有RNA酶污染。

◆低核酸产量或者纯度不高
·试剂盒储存在非最佳条件
收到试剂盒后总是存放在室温（15℃-20℃）。
·缓冲液或者试剂暴露于减少它们有效性的条件下
储存在室温（15℃-20℃）每次用完后立刻盖紧盖子，以免溶液蒸发、PH改变和污染。
·缓冲液Buffer W2中忘记加无水乙醇
第一次实验时，在缓冲液Buffer W2中加入指定量无水乙醇。
·试剂和样品没有充分混匀
加入每个试剂后都要充分混匀。
·蛋白酶K失效或者消化不完全
收到蛋白酶K后，充分溶解，按照每次使用量分装冻存，避免反复冻融。
·洗脱效率不高
确保缓冲液Buffer W2已清除干净，否则残留乙醇会影响洗脱效率 ，仔细阅读洗脱操作步骤。

◆纯化的DNA/RNA产物OD260数值异常偏高
·一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了分光光度计读数
建议：将洗脱的回收DNA/RNA溶液12,000×g再离心一分钟，小心取上清使用。

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