Hoechst 33258染色液

特别提示：包括Hoechst 33258染色液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Hoechst 33258染色液
英文名称：Hoechst 33258 Staining Solution
产品货号：YT893
产品规格：10ml|50ml

本Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。

Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。

Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

CAS：23491-45-4
分子式：C25H24N6O·3HCl
分子量：533.88

注意事项：
1. 本Hoechst 33258 染色液的浓度经过百奥莱博的优化，确保可以满足各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的Hoechst 33258，请选购百奥莱博的Hoechst 33258(YT892)。如需染色活细胞或培养的组织，请选购百奥莱博的Hoechst 33342活细胞染色液(100X) (YT896)，效果更佳。
2. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。
3. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。抗荧光淬灭封片液(YT097)可以向百奥莱博订购。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

除了Hoechst 33258染色液,，我公司还供应以下相关产品：



名称：细胞凋亡与坏死检测试剂盒
货号：YT130
规格：100次
本试剂盒提供了一种经典而又快速简便的细胞凋亡与细胞坏死检测方法。染色快速方便，两种染料的染色仅需20-30分钟，一步染色即可完成。使用方便，使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可以为10-100万。

试剂盒组份：
细胞染色缓冲液———100ml
Hoechst染色液———0.5ml
PI染色液——————0.5ml

本试剂盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)双染的方法。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。
Hoechst 33342可以穿透细胞膜，染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋强蓝色荧光。参考下图，左图为诱导凋亡前的正常细胞，右图为诱导凋亡后的细胞。



注意事项：
1. 需使用流式细胞仪进行红色和蓝色双荧光检测。也可使用荧光显微镜检测。
2. 染色后宜尽快检测。
3. Hoechst 33342对人体有害，碘化丙啶(PI)对人体有刺激性，请注意适当防护。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

名称：Caspase-3活性检测试剂盒(分光光度法)
货号：SNM513
规格：100T|50T|20T

名称：线粒体蛋白提取试剂盒
货号：SNM525
规格：100T|50T

名称：TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒(显色法，通用型)
货号：SNM538
规格：50T|20T

名称：Annexin V-kFluor647/7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒
货号：KFS195
规格：10T|20T|50T|100T
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素keyFluor647 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。

注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-kFluor647 避光保存及使用。
3. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
4. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2% BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
5. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
6. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

名称：Hoechst 33342 染色液(即用型)
货号：QN1322
规格：10ml|50mL
本Hoechst 33342染色液为即用型，可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

Hoechst 33342，也称bisBenzimide H 33342或HOE 33342，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33342的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm;Hoechst 33342和双链DNA结合后，最大激发波长为350nm，最大发射波长为461nm。

使用说明：

1. 对于固定的细胞或组织：
a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。
b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可;对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
c. 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2. 对于活细胞或组织：
a. 加入适当量Hoechst 33342染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。
b. 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。

注意事项：
1、荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂。建议染色后尽量当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

名称：MTS细胞增殖与毒性检测试剂盒
货号：HR0489
规格：250T/500T/1000T
MTS细胞增殖与毒性检测试剂盒是应用新型的水溶性甲臢化合物[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(金翁)，内盐；MTS]快速高灵敏度检测细胞增殖和细胞毒性的比色检测产品。
MTS被细胞生物还原成一种可溶于组织培养基的甲臢化合物，新陈代谢活跃的活细胞内的脱氢酶类将MTS转化成液态可溶的甲臢化合物，这种甲臢化合物在490nm的吸收值可以直接在96孔板上测量，而不需要另外作处理。由490nm测量的吸收值所表示的甲臢产物的数量与培养物中活性细胞的数量成正比。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数量呈线性关系。
MTS溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分，MTS溶液很稳定，对细胞没有毒性，可以长时间孵育细胞。MTS法测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的灵敏度高，无放射性，检测细胞增殖实验的灵敏度比其它方法如MTT,XTT和WST-1高。

储存条件：2-8℃避光保存。长期不用的分装后于-20℃避光保存，避免反复冻融。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
● 需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。
●用培养基或PBS来配制待检测药物。如果待测药物有还原性，则测定不含细胞，仅含有MTS的待测药物溶液在490nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入MTS ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100μl培养基和10μl MTS 进行检测。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 加MTS溶液后孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，对于大多数情况孵育1小时即可，白细胞需要培养较长时间。
● 如果不是使用96孔板检测，MTS溶液的用量相应等比例增加即可。
特点：
● 易于使用：直接将MTS溶液，加入到细胞中，孵育然后读取吸光度值。
●快速：在96孔板中进行检测，不需洗涤或收获细胞。也不需要溶解步骤。因为MTS甲臢产物可溶解在组织培养基中。
● 非放射性：不需液闪混合液，不需处理放射性废物(不像[3H]-胸腺嘧啶)。
● 灵活：平板被读数后还可以放回温箱继续颜色反应(不像MTT)。
● 安全：不需要挥发性有机溶剂来溶解甲臢化合物(不像MTT)。
应用：
● 细胞增殖；细胞毒性；凋亡结果
● 化学灵敏性
● 细胞贴附确定；趋化性
活性测定使用方法：
1．收集细胞，加细胞悬液100μl(约5000-10000个细胞)到96孔板(边缘孔用无菌水或PBS 填充)。每板设对照(加100μl培养基)。
2．置37℃，5% CO2孵育过夜，倒置显微镜下观察。
3．每孔加入10μl待检测药物溶液，37℃孵育。
4．每孔加入10μl MTS溶液，37℃孵育1-4小时。
5．测定490nm各孔的吸光值。
6．同时设置空白孔(培养基和MTS溶液，无细胞)，对照孔(不加药培养基和MTS溶液，有细胞)，每组设定3-5 复孔。

结果分析：
细胞活力计算：
将各测试孔的OD 值减去调零孔OD值或对照孔OD值。各重复孔的OD值取平均数。
细胞活力% =(加药细胞OD-空白OD/对照细胞OD-空白OD)×100
数量测定使用方法：
1．先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2．按比例(例如：1/2 比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3．接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加MTS试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)，OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入MTS后的培养时间)。