一步法(快速/无缝)克隆试剂盒

特别提示：包括一步法(快速/无缝)克隆试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一步法(快速/无缝)克隆试剂盒
英文名称：One Step Pcr Cloning Kit
产品货号：SY0279
产品规格：25T

一步法（快速/无缝）克隆试剂盒是一款简单、快速、高效的DNA定向克隆产品，该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点，可高效克隆50 bp～10 kp片段。将载体在克隆位点进行线性化，并在插入片段PCR引物5’端引入线性化克隆载体末端序列，使得插入片段PCR产物5’和3’zuì末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列 (15 bp～20 bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合，在重组酶Exnase的催化下，仅需反应30 min即可进行转化，完成定向克隆。克隆阳性率可达95%以上。克隆载体酶切产物或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化直接用于重组克隆，极大的简化了实验步骤。

试剂盒中包含有重组反应所需缓冲液和重组酶Exnase，Exnase中添加了独特的重组增强因子，显著提高重组克隆效率，即便使用低效率感受态细胞 (107 cfu/μg)也可实现高效克隆 (100 cfu/ng Vector)，而且Exnase还兼容常规酶切、PCR反应体系。

一步法（快速/无缝）克隆试剂盒可用于快速克隆、高通量克隆、无缝克隆和DNA定点突变。

产品组份：
5×CE Buffer——————100μl
Exnase——————50μl
500 bp control insert (25 ng/μl)——————5μl
pUC 19 control vector, linearized (50 ng/μl)————5μl

实验流程概览

1) 线性化克隆载体制备；
2) 插入片段扩增引物设计；
3) 插入片段PCR扩增；
4) 进行重组反应；
5) 反应产物转化、涂板；
6) 克隆鉴定。


图一 实验流程概览

注：插入片段PCR扩增时，引物5’端引入线性化克隆载体末端同源序列 (图中以蓝色和橙色标记)，使得扩增产物5’和3’zuì末端序列分别和线性化克隆载体两末端序列完全一致。

除了一步法(快速/无缝)克隆试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：即用型蓝白T载体C型(T7-T3，无MCS)
货号：BTN120513
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段，其两个末端的5′都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 无Nde I和Nco I等多克隆位点，便于重组基因的克隆
4. 来源于pBlueSoript Ⅱsk(+)，故克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

组分	规格
即用型蓝白T载体C型(10ng/μL)	60μl
阳性对照(35ng/μl)	30μl

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

质粒图谱


名称：放*菌酮
货号：BTN120688
规格：1mL
本品为浓度为100mg/mL放*菌酮的甲*溶液。放*菌酮(Cycloheximide from microbial；CHX；Naramycin A)，化学式C15H23NO4分子量281.35，外观无色晶体熔点119.5-121℃。易溶于甲*、乙醇和丙*，微溶于水。放*菌酮拥有非常强烈的毒性，包括损害DNA、导致畸形胎儿和其它对繁殖过程的效应等，一般只用在体外研究中。放*菌酮是一种在真核生物中对蛋白质生物合成过程有抑制效应的化合物，它是灰色链霉菌(Streptomyces griseus)的一种产物。它通过干扰蛋白质合成过程中的易位步骤而阻碍翻译过程。在分子生物学中放*菌酮可用来确定蛋白质(酶)的半衰期；可作为植物生产调节剂；可用于筛选CHX抗性的酵母和真菌菌株。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期6个月。

名称：IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒(白介素6启动子质粒)
货号：YT457
规格：1μg
IL-6启动子报告基因质粒是用于检测IL-6 promoter转录活性水平的报告基因质粒。IL-6启动子质粒是以pGL6质粒为模板，在其多克隆位点插入了human IL-6的启动子序列(-637bp～+53bp)，可以高灵敏度地检测IL-6 promoter的激活水平。

IL-6(Interleukin-6)，中文名为白细胞介素-6，简称白介素6，是一种非常重要的炎性细胞因子，在炎性疾病的发生发展过程中起重要作用，常作为炎症反应的重要指标。

pGL6质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到zuì低。

IL-6启动子质粒的主要信息如下：
 

Base pairs	6252
IL-6 promoter	20-707
luc2 reporter gene	753-2405
SV40 late poly(A) signal	2440-2661
SV40 early enhancer/promoter	2709-3127
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor)coding region	3152-3946
Synthetic poly(A) signal	3971-4019
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	4086-4105
ColE1-derived plasmid replication origin	4343
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	5134-5994
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	6099-6252
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	6201-6220

IL-6启动子质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. pIL-6-promoter-luc可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。
3. LPS等常见的可以激活IL-6 promoter的试剂，可以用作IL-6启动子报告基因检测时的阳性对照。

储存条件：-20℃。