植物组蛋白提取试剂盒

特别提示：包括植物组蛋白提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：植物组蛋白提取试剂盒
英文名称：Plant protein extraction kit

产品货号：植物组蛋白提取试剂盒
产品规格：50T/100T

产品简介：
植物组蛋白提取试剂盒提供了一种简单而应用广泛的方法以及相应的试剂提取组蛋白。适用于从各种植物细胞、组织样本中提取组蛋白。提取过程简单方便。组蛋白提取产物的产量大约0.2-0.4 mg 每107个细胞或100mg组织，不同的细胞和组织中，产量差异很大。
提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、组蛋白修饰实验比如乙酰化、甲基化、sumoylation等下游蛋白研究。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液A 2-8℃保存，蛋白提取液B、C室温保存。
有效期：一年。

产品特点：
1．使用方便，不需经过反复冻融、超声破碎等前处理。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管
● 振荡器、涡旋混匀器 ●冰箱，冰盒
使用注意事项：
1．旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2．实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3．蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法：
植物组织组蛋白提取：
1.提取液制备：每500μl蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
【注】
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取100mg植物组织样本用剪刀尽可能剪碎，加入蛋白提取液A，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3．将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，静置10分钟，在4℃，16000g条件下离心15分钟，弃上清。
4．沉淀中加入100μl组蛋白提取液B。
5．用200μl 枪头反复吹打混匀或充分涡旋振荡混匀，置4℃冰箱过夜存放。
6．16000g条件下离心10分钟，收集上清。
7.在上清中加入10-20μl试剂C充分混匀。
8．加入上样缓冲液混匀后煮沸，分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】
● 加入上样缓冲液后应为上样缓冲液的郎瑟，如果颜色变黄，可以再加入试剂C混匀，每次加入5μl，至恢复蓝色为止。
植物细胞组蛋白提取：
1．提取液制备：每500μl蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
2．收集5-10×106个细胞，在4℃，1000g条件下离心5-10分钟，吸干上清，收集细胞。
3．用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．每5-10×106个细胞中加入500μl蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下轻轻振荡15分钟。
5.在4℃，16000g条件下离心15分钟，弃上清。
6．沉淀中加入100μl组蛋白提取液B。
7．用200μl枪头反复吹打混匀或充分涡旋振荡混匀。
8．置4℃冰箱过夜存放。
9．16000g条件下离心10分钟，收集上清。
10.在上清中加入10-20μl试剂C充分混匀。
11．加入上样缓冲液混匀后煮沸，分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 加入上样缓冲液后应为上样缓冲液的郎瑟，如果颜色变黄，可以再加入试剂C混匀，每次加入5μl，至恢复蓝色为止。

除了植物组蛋白提取试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：中等RIPA裂解液
货号：BTN131007
规格：250mL
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强，对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果，本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂，能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表：

产品名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
有效裂解成分	1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.5% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.25% deoxycholate
裂解强度	强	中	温和
对膜蛋白的提取	很好	较好	一般
对胞浆蛋白的提取	很好	很好	很好
对核蛋白的提取	很好	较好	较好
胞浆磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
细胞核转录因子提取	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制剂	是	是	是
含磷酸酯酶抑制剂	是	是	是
主要用途	WB,IP	WB,IP	WB,IP,co-IP

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

对于培养细胞样品：
1. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

对于组织样品：
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

备注：
1.为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒，不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。