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50μl
产品简介:
LentiFitTM脂质体转染试剂是一种高效的阳离子脂质体转染试剂。与其他脂质体转染试剂相比,汉恒生物独立研发的 LentiFitTM脂质体转染试剂具有转染效率高,重复性好,操作简单,无明显细胞毒性,抗血清干扰等优点。对于大多数细胞,用LentiFitTM转染后72小时内不更换培养液无明显细胞毒性。同时,血清的存在不影响LentiFitTM的转染效率,这样可以减小无血清对细胞的损伤。基于以上优点,LentiFitTM常用做慢病毒包装的转染试剂。
包装清单以及储存条件:
| 试剂名 | 货号 | 储存条件 | 规格 | 有效期 |
| LentiFitTM转染试剂 | Let1000 | 4℃保存 | 1 mL | 12个月 |
使用方法:
1. 细胞培养:以1个10 cm培养皿转染293T细胞为例,转染前一天接种细胞(20-24小时),接种细胞约3.5×106 ,接种体积10 mL,确保第二天转染时细胞汇合度(confluent)能达到约50%~70%。
2. 在进行转染步骤前,把10 cm培养皿中的培养液更换成新鲜细胞培养液,培养液的体积为5 mL,放回培养箱中继续培养,并准备转染体系(步骤3-6)。
3. 把LentiFitTM脂质体转染试剂轻轻混匀。
4. 对于待转染的10 cm培养皿中的细胞,取一只洁净无菌离心管,加入24 µg质粒(目的质粒和辅助质粒的比例根据不同包装系统进行调整)到500 µL DMEM溶液,用枪轻轻吹打混匀。
5. 取另一只洁净无菌离心管,加入500 µL DMEM溶液,再加入40 µL LentiFitTM,用枪轻轻吹打混匀,室温放置5分钟。
6. 将步骤4与5中的质粒溶液与LentiFitTM溶液混合,用枪轻轻吹打混匀。不可Vortex或离心。室温孵育20分钟。有可能出现絮状沉淀物,属正常现象,不会影响转染效率。
7. 将转染复合物逐滴加入到培养皿中,轻轻“8”字形摇晃混匀后,放回培养箱继续培养。
8. 培养6-12小时后,更换为完全培养基,继续培养。
注意事项:
1. 使用高纯度的DNA(A260/A280比值越近1.8越好)有助于获得较高的转染效率。对于质粒,推荐使用Qiagen公司生产的质粒大量抽提试剂盒进行高质量无内毒素抽提。
2. 细胞状态会极大影响转染效率,所以转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3. 需自备DMEM培养基,其他培养基如1640、MEM、alpha-MEM,F12,DMEM/F12、M199也均可以用于转染实验。
4. LentiFitTM不能vortex或离心,宜缓慢晃动混匀。
5. LentiFitTM使用后请立即盖好盖子,避免长时间暴露在空气中,影响转染效率。
6. 经测试,LentiFitTM细胞毒性不明显,非常适用于慢病毒包装;请在进行病毒包装时严格按照病毒安全操作进行。
7. 为了您的安全和健康,请在符合洁净度要求的细胞培养室中进行转染操作,操作时请穿实验服并戴一次性手套、口罩和无菌帽。
正装规格及价格:
| 规格 价格 1ml 1080 2ml 1680 3ml 2380 5ml 3480 10ml 7880 |
注:无特殊情况申请后7个工作日内发货
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