YTM 总RNA抽提试剂(Trizol法)

特别提示：包括YTM 总RNA抽提试剂(Trizol法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：YTM 总RNA抽提试剂(Trizol法)
英文名称：Total RNA Extraction Reagent(Trizol Method)
产品货号：YT526
产品规格：100ml

本试剂是一种用于动植物细胞或组织及细菌总RNA抽提的试剂。本产品采用和Invitrogen公司的TRIzol完全相似的原理和方法，抽提的方法和步骤完全相同。本试剂的颜色和TRIzol相同，加入*仿后上层呈无色，下层呈紫红色，便于吸取上层水相。

本试剂可以抽提长达15 kb的RNA，也可以抽提microRNA等小RNA。抽提小RNA时宜-70℃沉淀过夜。抽提所得RNA无DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值为1.8-2.0。裂解细胞或和组织共匀浆时，本试剂可以保持样品中RNA的完整性，即可以有效抑制RNA的降解。每一百万细胞用本试剂抽提可得5-15μg RNA；每毫克组织用本试剂抽提可得1-10μg RNA。产量因细胞和组织不同而异。每100ml 本试剂可以抽提100个六孔板中的样品或100个50-80mg的组织样品。抽提两个样品约需一小时。

本试剂抽提所得RNA可直接用于Northern，点杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase protection assay，cDNA克隆，以及RT-PCR；也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序(deep sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。

百奥莱博的本试剂(YT526)和Trizol(YT527)的成分有细微差别，实际抽提效果无任何显著差异。

注意事项：
1. 需自备*仿，*丙醇，DEPC，75%乙醇(DEPC水配制)，和DEPC水。DEPC水(YT528)可向百奥莱博订购。
2. 所有离心管，枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(体积比) diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或Milli-Q级水中，处理过夜，灭菌即成DEPC水。
3. 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA，推荐先加入适量本试剂，并裂解样品后冻存。
4. 必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。
5. 本试剂含有毒物质苯*，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触本试剂，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请听取医生意见。
6. 本试剂抽提总RNA的同时，理论上也可抽提蛋白和DNA，但未经测试。有兴趣者可按Invitrogen公司的TRIzol的操作步骤进行操作。

储存条件：4℃，有效期一年。

除了YTM 总RNA抽提试剂(Trizol法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：非冻型血液RNA保存液
货号：BTN111202
规格：100mL
由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题，本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上，开发了本产品。

产品特点：
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3个月。
2. 操作简单，直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3.适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液，不适用于陈旧血液和冻凝血液，也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好，效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNA提取试剂盒提取RNA。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：
注意：RNase污染无处不在，最好用本公司的高效无毒固相RNase清除剂处理RNA工作区域，千万不要使用烷基化试剂DEPC(相当于芥*气)。

一:以白细胞为材料的保存方法(此法效果好于全血保存法)
1.室温1500-2000 g离心新鲜抗凝血液10-15分钟，最上层为血浆，最下层为红细胞，中间层为膜状的、含白细胞的Buffy Coat(含白细胞多的血液此层可能很厚)。
2. 吸出血浆后，小心将中间的白细胞层吸出(允许污染部分红细胞)到新的离心管中，加入5-10倍体积的本产品，混匀后放常温(不超过30℃)保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜，然后再离心去除保存液，最后再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶会刺破白细胞，释放出其中的RNA，在后续实验去掉上清时会丢失)。

二：以EDTA抗凝全血为材料的保存方法
3. 将血液取到EDTA抗凝管中后，迅速将0.5mL血液与1.5mL本产品混合，充分颠倒混匀，然后放常温(不超过30℃)保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜，然后再离心去除保存液，最后再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶会刺破白细胞，释放出其中的RNA，在后续实验去掉上清时会丢失)。

三：血液RNA的提取(本产品不含RNA提取试剂。此处以本公司的跟Trizol相当的动物RNA提取试剂盒操作步骤为参考。用户也可以使用其他RNA纯化试剂)
4. 提取RNA时，如果保存的白细胞在-20℃，则需要先室温化冻，如果保存在常温或4℃，则直接使用。
5. 取1.8mL混合液到新的2mL离心管中，5000g室温离心1分钟。
6.小心吸弃上清液(本产品)，细胞将形成沉淀(如果样品时全血，沉淀中将含有大量血液蛋白)。注意：上清一般会很浑浊，一定要尽可能弃尽。有时沉淀上面有白色晶体出现，属于正常现象。
7.在细胞沉淀中加入动物RNA提取试剂盒 1mL溶液A，剧烈震荡30秒(不能感觉到震荡即可，一定要看见管底液体旋转起来，否则只是液体表面的震动，下同)。震荡后颠倒几次看溶液是否均匀，如果有颗粒状物体说明还需要震荡裂解。
8.室温放置5分钟以使细胞充分裂解。
9. 将0.2mL自备的*仿加入到离心管中，剧烈震荡30秒。
10. 12000～15000g4℃离心3分钟。一般上清为无色的水相(含RNA，约0.5-0.9mL)；中间层为白色，含有DNA、蛋白质和其他细胞破碎物，不要触及；下层为有机相，一般呈深红色。注意：有时水相比重大于有机相，出现反相现象，此时应该取下面的水相。
11.小心将水相转移到另一自备的1.5mL塑料离心管中。如果水相超过0.75mL，则需要分成2管，否则在下步没法加入等体积的*丙醇。
12. 加入等体积的*丙醇到水相中，充分颠倒混匀。
13. 12000～15000g4℃离心10分钟沉淀RNA。
14. 吸弃上清。注意：如果离心后出现两个相，则需要吸弃上面的一相，然后在下相(含RNA)中加入一倍体积的超纯水和一倍体积的*丙醇，混匀后12000～15000g4℃离心10分钟沉淀RNA，吸弃上清。
15. 将75% RNase-free乙醇加入到RNA沉淀中，震荡几秒后12000～15000g4℃离心1分钟。
16. 弃上清
17. 12000～15000g4℃离心半分钟，用移液枪去除残留的液体。
18. 将20-50μL DEPC处理的水加入到沉淀中并吹打溶解，立即用于下述完整性、产率和纯度的检测，也可直接用于后续RT-PCR等试验或存放于-80℃待用。

四: RNA的检测(列出步骤仅供参考，本产品不提供相关产品)
19. RNA完整性的电泳检测：强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶中单链RNA分子会自生折叠成各种形状，尤其不能使用DNA上样液，因为没有经过去RNase处理。
20. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA用TE缓冲液(pH8.2)稀释10倍后检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2-5μg/mL。
21. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。