线粒体膜电位检测试剂盒(TMRM法)

特别提示：包括线粒体膜电位检测试剂盒(TMRM法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：线粒体膜电位检测试剂盒(TMRM法)

产品货号：线粒体膜电位检测试剂盒(TMRM法)
产品规格：50T/100T



除了线粒体膜电位检测试剂盒(TMRM法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
货号：BTN140634
规格：500次
MTS是一种新型甲臜化合物，和MTT同属四唑氮衍生物。MTS能被活细胞里的线粒体脱氢酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜，通过测定甲臜的光谱吸收，进而可以测定细胞的增殖情况。原理如下：


产品特点：
1．本试剂盒是单溶液式细胞增殖与细胞毒性检测试剂，主要成分包含MTS和一个电子耦合试剂，溶液的稳定性强，反应的灵敏度高。
2．操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时，无需洗涤或收获细胞，免去溶解步骤。
3．无放射性。不需要配制液闪混合物，也不需要处理废弃物。
4．与MTT相比，使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。
5．操作灵活，与MTT不同，平板读数后可放回温箱继续孵育，使颜色进一步生成。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期半年。

使用效果：
96孔板中加入细胞100μL/孔(约1×104)，37℃，5% CO2细胞培养箱培养24小时，加入适当浓度的受试化合物。培养箱中孵育适当时间，每孔中加入10μL的MTS细胞增殖及毒性检测溶液。37℃孵育1-4小时。490nm波长检测光密度。

备忘录：
1．细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值(完全培养基加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)或空白药物孔OD值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)，各重复孔的OD值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。
细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
2．求出T/C = 50%时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

名称：Annexin V-APC/PI双染双染细胞凋亡检测试剂盒
货号：KFS191
规格：20T|100T|50T
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素APC 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V- APC 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。

注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-APC/PI 避光保存及使用。
3. PI 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

名称：PCNA细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)
货号：KFS335
规格：20T
PCNA 细胞增殖检测试剂盒（细胞免疫荧光法/流式细胞仪检测），PCNA是细胞DNA 多聚酶的“δ”辅助蛋白，是真核细胞DNA 合成时所必需的一种酸性核蛋白。PCNA 在细胞核内合成，并储存在核内，细胞处于静止状态时，其含量很低，当细胞进入增殖周期中，其表达明显增加，故PCNA 的表达高低可反映细胞增殖的活跃程度。

操作方法
1. 在最适的环境下培养细胞。
2. 除去培养液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶处理和收集细胞，离心，（注意1）保证每管细胞数在106 个。
4. 用0.3 ml PBS 轻轻的重悬细胞, 然后慢慢加入0.7 ml 预冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混匀。在4°C 至少1h。（注意2）
5. 沉淀细胞，完全吸去上清。
6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗细胞2 次。
7. 用100μl 抗体孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重悬细胞，加入1ul PCNA 抗体(1μg/106 cells)，室温孵育1 小时。
8. 离心收集细胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。
9. 离心收集细胞，用50μl 抗体孵育液重悬，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室温孵育30 分钟。离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。
10. 用含有终浓度为10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重悬细胞。
11. 避光使细胞在室温下孵育20min 后，离心收集细胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，转移至流式检测管中重悬。
12. FACS 检测或者储存于4℃。

注意事项
1.所有的沉淀细胞步骤为2,000 rpm, 5 min。
2.可渗透化处理细胞后细胞浓度大约为106 ，样品可以4°C 储存于乙醇中到2 个星期。
3.流式细胞检测时需要设立对照试验：
只用PI 染细胞
只用羊抗小鼠IgG-FITC 染细胞
未染色的细胞组

名称：TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Alexa Fluor 488)
货号：SY0476
规格：20T
本试剂盒应用范围广，可用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。

TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 细胞凋亡检测试剂盒（Alexa Fluor 488）可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基（3´-OH）末端掺入Alexa Fluor 488-12-dUTP，从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

Alexa Fluor 488染料稳定性更高，信号更强，从而使标记物更亮，抗淬灭能力更强。

试剂盒组份：
5×Equilibration Buffer ——————————750μl
Alexa Fluor 488-12-dUTP Labeling Mix————100 μl
Recombinant TdT Enzyme ——————————20 μl
Proteinase K(2 mg/ml)——————————— 40 μl
DNase I (1 U/μl)————————————— 5μl
10×DNase I Buffer with MgCl2—————— 100 μl

注意事项
1）需自备用于洗涤细胞的PBS，用于封片的抗荧光淬灭封片液，用于固定的4%多聚甲*。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：线粒体提取试剂盒
货号：QN1310
规格：50T|100T
线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。

操作步骤：

1. 样本处理：
a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨组织20次;
b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800g离心5~10 min收集细胞，计数。每次提取需要5×107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次。
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000g 离心5 min。
3. 取上清，转移至新的离心管中，4℃，1000g再次离心5 min。
4. 取上清，转移至新的离心管中，4℃， 12,000 g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
5. 往线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000 g 离心5 min。
6. 取上清，转移至新的离心管中，4℃， 12,000 g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底。
7. 用50 -100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事项：
1. 为保证获得完整的线粒体，务必做到：第一，全程低温操作;第二，快速;第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞，这是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。3. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解线粒体。 转速与离心力换算：G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２ G为离心力，一般以ｇ(重力加速度)的倍数来表示;[rpm]２即：转速的平方;R为半径，单位为厘米。

储存条件：-20℃