DAPI溶液(5mg/ml)

特别提示：包括DAPI溶液(5mg/ml)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DAPI溶液(5mg/ml)
英文名称：DAPI Solution
产品货号：YT890
产品规格：5mg/ml×0.2ml

本品DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。

DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。

DAPI的zuì大激发波长为340nm，zuì大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，zuì大激发波长为364nm，zuì大发射波长为454nm。

本DAPI溶液用水配制，浓度为5mg/ml。用于细胞核染色时，推荐的DAPI工作浓度为0.5-10μg/ml。

CAS：28718-90-3
分子式：C16H15N5·2HCl
分子量：350.25

注意事项：
1. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
2. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。抗荧光淬灭封片液(YT097)可以向百奥莱博订购。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。

除了DAPI溶液(5mg/ml),，我公司还供应以下相关产品：



名称：MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
货号：BTN140634
规格：500次
MTS是一种新型甲臜化合物，和MTT同属四唑氮衍生物。MTS能被活细胞里的线粒体脱氢酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜，通过测定甲臜的光谱吸收，进而可以测定细胞的增殖情况。原理如下：


产品特点：
1．本试剂盒是单溶液式细胞增殖与细胞毒性检测试剂，主要成分包含MTS和一个电子耦合试剂，溶液的稳定性强，反应的灵敏度高。
2．操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时，无需洗涤或收获细胞，免去溶解步骤。
3．无放射性。不需要配制液闪混合物，也不需要处理废弃物。
4．与MTT相比，使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。
5．操作灵活，与MTT不同，平板读数后可放回温箱继续孵育，使颜色进一步生成。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期半年。

使用效果：
96孔板中加入细胞100μL/孔(约1×104)，37℃，5% CO2细胞培养箱培养24小时，加入适当浓度的受试化合物。培养箱中孵育适当时间，每孔中加入10μL的MTS细胞增殖及毒性检测溶液。37℃孵育1-4小时。490nm波长检测光密度。

备忘录：
1．细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值(完全培养基加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)或空白药物孔OD值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)，各重复孔的OD值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。
细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
2．求出T/C = 50%时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

名称：Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒
货号：KFS187
规格：10T|20T|50T|100T
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素PE 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。

注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE 避光保存及使用。
3. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，不推荐用于检测组织样本。
4. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
5. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
6. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

名称：DAPI染液(即用型)
货号：SY0496
规格：10ml
本产品浓度已经过优化，确保可以满足各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的DAPI，请选购DAPI（SY0495）或DAPI染液（5mg/ml）（SY0496）。

DAPI，也称DAPI dihydrochloride，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。因为DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。

DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。

CAS：28718-90-3
分子式：C16H17Cl2N5
分子量：350.25
储存条件：4℃，有效期六个月

注意事项
1)DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
2)荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3)为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

名称：细胞周期检测试剂盒
货号：HR0408
规格：20T/50T/100T
细胞周期(cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1 期、S 期、G2 期和M 期组成。G1 期：细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。S 期：DNA 开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于G1 期和G2 期之间。当DNA 复制结束成为4倍体时，细胞进入G2 期。G2 期的细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M 期。因此，单纯从DNA含量无法区分G2 期和M 期。一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期(G0期)，而G0 期从DNA含量上同样无法与G1 期区分。因此，整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M 期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S 期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。
PI 为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA 双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA 复制的S 期细胞的荧光强度为1-2 之间。
细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA 能够和荧光染料结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。

储存条件：-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事项：
1．细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
2．固定时在振荡器上轻轻振荡细胞，并缓慢滴加75%乙醇，直接加入会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS 悬浮细胞，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-75%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。
3．为防止不同批次细胞在实验时本身所出周期不同导致重复性差，可以在实验前进行细胞的同步化处理，减少批间差异。实验细胞应处于对数生长期，不能是完全长满，一般在50～80%比较好。
4．分析的时候需要的是单个的细胞，400 目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉，否则会出现人为的多倍体干扰，不过如果经验丰富的操作人员也可以gate掉。如果没有条件过滤，请在染色之前将细胞弹的很散，再进行染色。
5．组织处理方法：用剪刀将组织剪成小块，用 0.25%胰酶消化30min－1h，200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。如组织难以消化，可加入适量胶原酶。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水● 移液器及吸头 ● 流式细胞仪

使用方法：

使用注意事项：
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● zuì好使用含EDTA的细胞消化液。
● 洗涤细胞离心转速不可超过800g。
● 乙醇固定时离心大概采用2000g力5分钟，离心力太小可能部分细胞难以沉淀。

1．收集样本细胞，细胞数量在1-5×106个。
2．用冷PBS 洗涤细胞两次。
【注】：800g左右，离心5分钟，小心吸取上清，避免吸走细胞。
3．70%-75%冰冻乙醇-20℃固定1小时或4℃固定过夜。
【注】：轻轻吹打混匀，避免细胞成团；不能太剧烈，防止细胞损伤成碎片。
到此步可以存放，-20℃保存样品，1周内样品检测不受影响。
4．用冷PBS 洗涤细胞一次。
5．用200-500μl冷PBS重悬细胞。
6．加入Rnase A溶液20μl 37℃水浴30分钟。
7．400 目筛网过滤。
【注】：无细胞筛网可以不做此步骤。
8．加入400μl PI染液，轻轻混匀后4℃避光孵育30分钟-1小时。
【注】：染色完成后宜在24h内完成流式检测。
9．流式检测结果。激发波长为488nm。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。