BL21(AI)化学感受态细胞

特别提示：包括BL21(AI)化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：BL21(AI)化学感受态细胞
英文名称：BL21(AI)Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0039
产品规格：10×100μl/50×100μl

BL21(AI)感受态细胞是大肠杆菌B/r型菌株(E.coli B/r)，BL21(AI)来源于BL21菌株，为膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株。
该酶的缺失能够有效防止表达的异源目的蛋白在细菌体内的降解。
使用L-阿拉伯糖诱导araBAD启动子下游的蛋白表达。使用葡萄糖可以抑制araBAD启动子下游的蛋白表达。
BL21(AI)感受态细胞适用于任何以 T7启动子为基础的表达载体，能够进行高水平的重组蛋白表达。因为菌株体内的T7 RNA聚合酶水平能够进行有效调节，BL21(AI)感受态细胞能够有效表达对其他BL21细胞有毒或生长抑制的蛋白。
从 BL21(AI)菌株中获得目的重组蛋白产量，和其他BL21菌株产量相当。High5TM系列BL21(AI)感受态细胞由特殊工艺制作经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
保存条件：-80℃
基因型：
F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm araB::T7RNAP-tetA
操作说明：
1.取100μl冰上融化的BL21(AI)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含50µg/ml四环素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意：
1.Brian Caliendo(Voigt实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中，而pCP20转化到其他菌株中都很正常，但是菌体原因未知。
2.即使不加葡萄糖，BL21(AI)细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低，加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。
注意事项：
1.感受态细胞zuì好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白，zuì佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
建议选择该菌株进行蛋白表达的条件如下：
1.使用T7启动子载体(高拷贝或者低拷贝都可以)进行蛋白表达。
2.使用其他BL21进行蛋白表达时，观察到明显的细菌生长的抑制作用。
3.表达一个已知的毒性蛋白。

除了BL21(AI)化学感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：λDNA
货号：BTN90407A
规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。

名称：常态大肠杆菌细胞转化液(免感受态细胞制备)
货号：BTN51101
规格：20次
本品能使各种常态的E.coli细胞直接用于快速转化实验，使广大用户不再因为简单的转化实验而再为感受态细胞的制备，保存和运输等繁琐的事情而操心，大大地缩短了基因克隆实验的时间，提高使用者的工作效率。

产品特点：
1. 不需专门制备感受态细胞,直接使用常态的细胞进行质粒转化,随用随配,十分方便。
2. 常态细胞包括新鲜培养的菌液,新鲜的或4℃放置数月的培养基菌落,甘油菌种保存液等。
3.适用菌种和质粒广泛,用过的E.coli菌种包括K12 系的DH5a和Tg1，B 系的BL21(DE3)。用过的质粒有pGEM，pET和Clion系列等。
4.转化效率适中，使用10ng质粒转化一般能得到上万个转化子)效率在10E5 到10E6 CFU/ug质粒之间),使用3-5μL连接液转化一般能得几千个转化子,足够筛选重组子使用(但不适合构建文库)。
5. 单管快速操作，整个操作可以在一个1.5mL塑料离心管中进行，zuì短可以在三十分钟内完成，不需要过夜细菌培养,热休克处理甚至恒温摇床,极其适用于自动化的大规模克隆筛选工作。
6. 稳定性好，本可以在-20℃条件下长期保存而不用担心转化效率的降低,而感受态细胞在同样条件下会迅速失去活性。
 

成分	规格
常态转化液	1ml
阳性对照(pGEM3或pUC19)10μL,1ng/μL	5T
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 标记无菌的1.5mL塑料离心管并加入1mL液体培养基(如SOC或LB)，每次转化试验zuì好加上阳性对照(用提供的pGEM3或其他质粒)和阴性对照(不加DNA)各一个。
2. 如果使用E.coli菌落,则直接用接种环,无菌牙签或无菌吸头从培养皿上挑取1-5个菌落(直径在3-5 mm之间)到每个离心管中，用移液枪轻柔吹打散开。如果使用甘油菌种保存液,则直接取50-100μl菌种液到1mL培养液中。如果使用单个菌落培养得到的新鲜培养液，则取1mL培养了3-4小时的菌液直接从第4步开始。
3. 37℃保温1小时(如果保温时间延长到3-4小时，可以提高转化效率一倍，但过长则转化效率又开始降低)。
4.室温10000rpm离心1分钟后小心移弃上清(液体培养基)，离心速度低于10000rpm则细菌沉淀易丢失。沉淀的细菌约芝麻或麦片大小为宜。细胞过多或过少都不好。
5. 短暂离心，用移液枪小心将残留的培养液(约50μl)吸出，否则残留培养基将会严重影响转化效率，故此步不能省略。
6. 加入50μl 冰浴的Clion转化液并小心将细胞吹打均匀。
7. 加DNA样品。在样品管中加入1-5μl连接反应液并轻柔吹打均匀；在阳性对照管中加入5 ng阳性质粒(没被酶切的载体，也可以使用常用的pGEM，pUC，pBR322等质粒)；在阴性对照管中加入连接反应的阴性对照，如果没有则不加入任何溶液或加入1-5μl无菌水。
8. 将上述离心管置于-20℃直到液体凝固为止(一般需要20分钟到1小时)，然后冰浴放置5-10分钟。
9.在每个离心管中加入1mL无抗菌素的SOC或LB培养液，混匀后置37℃水浴保温1小时以便让抗性基因表达,否则将没有转化子生长。
10. 将溶液充分吹打混匀后分别取30-200μl分别涂于含相关的抗菌素的培养盘上，剩余溶液zuì好留4℃待用。
11. 37℃ 16-24小时培养，阴性对照盘上不应有任何落菌，否则可以判断操作中有污染或培养基中抗菌素浓度不够。使用质粒转化的阳性对照100μl涂盘一般能有上千个菌落。连接样品转化所得菌落数将取决于连接反应效率等多种因素，100μl的涂盘一般有几十到几百个转化子。

使用效果：

左图是用10 ngClionG载体转化10个E.coli Tg1菌落后得到的转化子。右图是用3μL连接液(ClionB载体+1 Kb DNA片段,10μL反应体系)转化10个E.coli DE3菌落后37℃过夜保温得到的转化子。涂盘量均为200μL。