北京农杆菌EHA105化学感受态细胞现货供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京农杆菌EHA105化学感受态细胞现货供应由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多农杆菌EHA105化学感受态细胞等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京农杆菌EHA105化学感受态细胞现货供应
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN140383
 本产品为EHA105农杆菌化学感受态细胞，为C58型背景，核基因中含有筛选标签-利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pEHA105(pTiBo542DTDNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。本产品适用于水稻、烟草等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达103cfu/μg。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1ug(体积不大于10μl)质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置5分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2～3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。
 注：当平板只含有50μg/mL kan时，28℃培养48 h 即可；平板中同时加入50μg/mL kan、20μg/mL rif时，需28℃培养60 h；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要28℃培养72-90h。

注意事项：
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4. 利福平浓度不应高于25μg/mL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/mL kan，若所用平板含有20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

欲咨询购买北京农杆菌EHA105化学感受态细胞现货供应，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·病毒沉淀剂
编号：BTN110810
英文名称：Virus Precipitation Reagent
规格：100mL
生物医学实验中，常常需要从液体样品(如血浆，培养基)中纯化病毒，但由于病毒颗粒十分细小，传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来，此操作非常繁琐，并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点，本公司开发了本产品。

产品特点：
1. 能浓缩病毒100倍以上，适合各种病毒。
2. 比超速离心法、密度梯度离心分离法和过滤法更温和，回收率更高，并且大部分病毒能保持活性，适合各种后续实验，包括转染实验和核酸纯化。
3. 比超速离心法和密度梯度离心分离法简单，不需要大型离心机等设备。
4.适合水样、细胞培养基上清和其他不含细胞的样品。本产品100mL可以处理400mL含病毒的溶液，可以将病毒浓缩100倍以上。
5. 已经成功用于coronaviruses 、rhabdoviruses 、parainfluenzaviruses 、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。
6. 对环境水样，请不要使用本产品，而是使用水体病毒沉淀剂。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂：PBS缓冲液或TES缓冲液(用于重悬病毒)

使用方法：
注意：需要尽量减少含病毒溶液中蛋白的浓度。收集培养细胞分泌的病毒前，最好换上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培养基。
1. 将培养细胞刮下，和培养基一起全部转移到干净的离心管中，10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果培养细胞内还有病毒颗粒，并且病毒颗粒可以抵抗冻融，则可以把细胞冻融数次，释放出包浆的病毒，然后再转移到干净的离心管中，10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果病毒溶液不含细胞成分，则直接进入下一步。
2.在含病毒的上清中加入1/4 总体积的本产品(4mL 病毒溶液则加1mL 本产品)，4℃冰箱中放置过夜或12小时以上。病毒在此期间将形成沉淀。
3. 10000rpm 4℃离心20分钟收集病毒沉淀，尽可能弃掉所有上清(可以暂时保留上清，等确认病毒浓缩成功后再丢弃)。
4. 将离心管放回离心机短暂离心数秒，再次小心去除残留上清。
5. 将沉淀(病毒颗粒)溶于适量预冷的自备的缓冲液(如PBS缓冲液、TES缓冲液和培养基中，取决于后续实验)，立即使用或者-20℃长期保存。


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·链霉亲和素磁珠
编号：BTN130521
英文名称：Magnetic beads binding with streptavidin
规格：2mL
本产品是由磁性纳米颗粒与高纯度的链霉亲和素共价偶联而成。这种微球能用于捕获生物素标记的底物，如抗原、抗体和核酸等。链霉亲和素(streptavidin)与生物素(biotin)的结合是最著名的非共价生物交互作用之一，因此，这也是亲和层析法所使用的一种强大工具。生物分子可以与生物素轻松融合，而层析基质上固定的链霉亲和素配体可以与之结合，而且这种链霉亲和素-生物素相互作用具有较低的非特异亲和性，捕获所需的底物能够直接应用于后续实验。本产品可广泛应用于免疫学检测、核酸纯化、核酸固相杂交检测、细胞分选等分子生物学实验。

产品特点：
1. 对于生物素化样品的捕获、漂洗及检测等流程操作更加简便。
2. 体系经过优化，更易于大规模、多样品、自动化操作。
3. 磁珠浓度：1%磁珠含量；
 固相载体：超顺磁性硅基磁珠；
 磁珠粒径：1μm；
 pH耐受范围：2-9。
4. 载样量(每毫克磁珠)：﹥3000pmol游离生物素；﹥450pmol生物素标记的单链寡核苷酸；﹥20μg生物素化IgG。
5.缓冲液：10mM PBS，0.1% BSA，0.05% sodiu*(代"m") azide，0.1% Tween20。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 取适量磁珠(推荐每次取30μL-50μL 磁珠混悬液，用户可根据样品种类及需求调整使用量)于干净离心管中，通过磁力架磁分离后弃上清。
 注：磁珠使用前请使用上样缓冲液淋洗磁珠3-5次，以保证磁珠的使用效果。
2. 加入待反应样品，室温振荡反应10-30分钟后(反应时间根据生物素化分子的大小及空间结构的复杂性可适当延长)，置于磁力架上进行磁分离，弃上清，并用上样缓冲液重复淋洗3次。
3. 链霉亲和素和生物素的结合非常迅速，且结合后不受pH，温度，有机溶剂和其他变性剂的影响。下表列出了常用链霉亲和素和生物素的解离办法及效率(基于游离生物素，与偶联复合物的生物素数据有明显差异)，用户也可根据自己样品的需求自行设定洗脱方式。
4. 洗脱后的样品客户可根据需求采用适当方法检测。
洗脱条件参照表：

 

洗脱温度和时间	洗脱溶液	洗脱效率
90℃ for 10min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.8%
90℃ for 5min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.4%
90℃ for 2min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.8%
65℃ for 5min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.4%
65℃ for 2min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	97.9%
37℃ for 10min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	41.9%
90℃ for 10min	H2O	7.3%
90℃ for 10min	10mM EDTA pH8.2	52.0%
90℃ for 10min	95%甲酰胺	35.9%
90℃ for 10min	30mM NaOAc pH9 and 95%甲酰胺	95.5%
90℃ for 10min	80mM NaOAc pH9 and 95%甲酰胺	97.3%
90℃ for 10min	140mM NaOAc pH9 and 95%甲酰胺	95.4%

使用举例：
利用链霉亲和素磁珠从总RNA中提取mRNA的方法
1. 取0.1-1mg的总RNA样品加入到无菌、无RNase的1.5ml离心管中，加入无菌去离子水至终体积为500μl(注：总RNA 量可低至50μg，但是在该条件下所提取得到的mRNA 常规电泳检测不到，需要采用RT-PCR进行微量检测)。
2. 将上步样品管于65℃温浴10min。
3. 加入3μl 生物素化的Oligo(dT)和13μl的20×SSC溶液到总RNA样品中，温和混匀，室温放置至完全冷却，这一步需要约10min左右。
4.预处理链霉亲和素磁珠：将链霉亲和素磁珠充分混匀后，取适量磁珠于1.5mL无菌、无RNase的离心管内，放在磁力架上，待磁液分离后，移除上清。加1mL 0.5× SSC 洗涤磁珠，放在磁力架上磁液分离，移除上清，重复两次。加100μl 0.5× SSC重悬链霉亲和素磁珠。
5. 将第3 步制备的总RNA 混合溶液加入到上步制备的已经洗涤好且重悬的链霉亲和素磁珠溶液中。
6.室温放置10min，期间每隔1-2min 轻柔混匀以防磁珠出现沉降现象。采用磁力架分离磁珠，小心移除上清，过程中不要触碰到磁珠，该步上清在确定mRNA已经结合并洗脱后再弃掉。
7. 加300μl 0.1×SSC溶液温和吹打或是轻弹洗涤磁珠，然后置于磁力架上分离磁珠，磁液分离后小心移除上清，重复三次，最后一步洗涤后尽可能移除所有上清液。
8. 加入100μl 无RNase 去离子水(洗脱液)，温和吹打或轻弹离心管使磁珠和洗脱液充分混匀。65℃水浴2分钟。
9. 置于磁力架上分离磁珠，将上清转移到一个新的无RNase的离心管内，不要触碰到磁珠(注：如果在转移过程中将磁珠悬起，可将样品管置回磁力架上重新吸取上清)。
10. 回收洗脱液中的mRNA。

链霉亲和素磁珠提取生物素化IgG
1.预处理链霉亲和素磁珠：链霉亲和素磁珠的保存需要加入BSA以保持其活性，故在使用链霉亲和素磁珠之前要彻底除去磁珠储存缓冲液中的BSA、叠氮*和Tween20。使用前需用PBS缓冲液于30分钟之内清洗3次以使磁珠达到最佳使用效果。
 注：在使用前必须彻底重悬链霉亲和素磁珠以保证最佳使用效果和重复性。如果磁珠出现结块现象请勿再继续使用。
2. 将生物素化的IgG 溶解于PBS，IgG浓度大于2mg/mL 较利于筛选。
3. 取100μl预处理过的链霉亲和素磁珠充分震荡混匀，置于磁力架上分离磁珠，去除上清，该过程尽量不要触碰到磁珠团。
4. 取500μl PBS 重悬磁珠，放于磁力架上，磁液分离后，移除上清，重复洗两次。PBS 重悬磁珠，使磁珠恢复到最初的浓度10mg/mL。
5. 将第2 步制备的IgG 加到磁珠管内，室温震荡反应30min。保持磁珠处于悬浮状态，以达到好的结合效率。反应结束后，置于磁力架上，磁液分离后，用移液器小心将上清移至一干净离心管内。注：该步上清可以用来检测未结合到链霉亲和素磁珠上的IgG浓度。
6. 加入1mL PBS溶液重悬淋洗磁珠，置于磁力架上，磁液分离后，移除上清，重复淋洗两次。
7. 选择合适的洗脱方式洗脱IgG。


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