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- 百奥莱博
- MT0102-XBK
- 北京
- 2025年07月16日
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244
- 英文名：
CCK8 cell proliferation and toxicity test reagents
- 保质期：
2年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100次(1ml)|500次(1ml×5)
特别提示：包括CCK8细胞增殖与毒性检测试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：CCK8细胞增殖与毒性检测试剂
英文名称：CCK8 cell proliferation and toxicity test reagents
产品货号：CCK8细胞增殖与毒性检测试剂
产品规格：100次(1ml)|500次(1ml×5)
本制品是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测的试剂，因其操作简单快速、高灵敏度且细胞毒性低等成为替代MTT法检测细胞生长密度的最好方法。该试剂盒利用水溶性四唑盐-WST-8在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲臜染料，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。本制品广泛应用于细胞增殖测定、细胞毒性测定、药物筛选、肿瘤药敏试验等。
产品特点：
·灵敏度高，数据重复性好；
·操作简单，安全性高；
·细胞毒性低，无需放射性同位素；
·单一组分，无需配制。
应用实例：
接种96孔板293T细胞，每孔加入10μl CCK-8溶液，混合均匀，在37℃，5% CO2培养箱中培养，酶标仪读取不同培养时间的OD值，做标准曲线。
操作方法：
一、细胞计数测定
1．96孔培养板中贴壁或悬浮细胞100μl/孔培养体积(>2000个细胞/孔)。
2．向每孔加入10μl的CCK- 8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。如果起始的培养体积为200μl，则需加入20μl CCK-8溶液。
注意：加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液，但没有加入细胞的孔作为空白对照。
3．将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4．用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
5．如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μl 1% w/v SDS溶液或者0.1M HCl溶液，并遮盖培养板避光保存。在24小时内吸光度不会发生变化。
二、细胞增殖实验和细胞毒性检测
1．96孔培养板中贴壁或悬浮细胞100μl/孔培养体积(＞5000个细胞/孔)。
2．向培养板加入10μl不同浓度的待测药物。
3．将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如:6,12,24或48小时)。
4．向每孔加入10μl CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。
5．将培养板在培养箱内孵育1～4小时。
6．用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
7．如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μl 1%w/v SDS溶液或者0.1M HCl溶液，并遮盖培养板避光保存。在24小时内吸光度不会发生变化。
三、制作标准曲线（需要测定细胞绝对数量时)
1．先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2．按比例(例如1:2的比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3～5个细胞浓度梯度，每组3～6个复孔。
3．接种后培养使细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定O.D值，制作出一条以细胞数量为X轴，O.D值为Y轴的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致)。
注意事项：
1．接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基或PBS，而不作为指标检测孔。
2．本制品的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。
3．用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
4．培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下，白细胞较难染色，因此需要较长的培养时间或增加细胞数量（~105个细胞/孔)。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于悬浮细胞，在培养1～4小时后，可先从培养箱中取出，目察染色程度或用酶标仪测定决定。若染色困难，可将培养板放回培养箱，继续培养数小时后再确定。 染色的最佳时间可定为悬浮细胞的最佳培养时间。对于贴壁细胞，培养时间一般为1～4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察染色程度（根据细胞种类而定，需要摸索一下条件)。
5．若细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化或pH发生变化，建议更换新鲜的培养基后再加CCK-8试剂。
保存条件：-20℃避光可保存2年，融化后 4℃避光放置可保存 1 年。反复冻融会增加背景值。
除了CCK8细胞增殖与毒性检测试剂,，我公司还供应以下相关产品：
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文献和实验简介 细胞增殖/细胞毒性测定是涉及培养细胞的研究中最常用的测试之一。 其是检查用于治疗的药物浓度的基本初步测试，也是确定各种研究领域（如肿瘤学和细胞死亡）药物疗效和安全性的非常重要的测试。 传统上，WST-8 或 ATP 检测（使用代谢活性作为指标）和 BrdU 或胸腺嘧啶核苷检测（使用 DNA 合成水平作为指标）已用于细胞生长特性的定量评估。 尽管这些检测由于其简易性和吞吐量而对我们有益，但这些检测都是间接评估方法，因此结果可能与实际细胞数无关。 在许多情况下，这些检测是终点评估，有时会
一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法
孔中加入配制好的梯度药物并继续进行实时动态检测， 即可获得化合物介导的细胞效应曲线及不同时间段IC50值。 四、实验结果实例 典型的利用RTCA技术获得的细胞增殖实验检测结果： 利用RTCA技术获得的典型的细胞毒性实验检测结果： 五、与传统方法（MTT）对比优势 1、实验操作简单，步骤少，人为误差小。 2、采用无标记方法，不存在标记效率问题，并且对细胞无损伤，细胞在最接近生理状态下进行检测，结果准确度高。 3、实验结果客观，重复性好，不需设置重复孔（实验
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