CCK-8试剂盒厂家直销

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名称：CCK-8试剂盒厂家直销
品牌：百奥莱博
英文名：Cell counting KIT-8
产地：国产|进口
编号：QN1293
规格：100T|500T|500T*10
本试剂盒为MTT法的替代方法，是一种基于WST(水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝*基)-3-(4-硝*基)-5-(2,4-二磺基*)-2H-四唑单*盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验。

使用说明：
一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3、接种后培养至细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X 轴)，OD 值为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

二、细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。
2、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增值-毒性检测
1、在96孔板中配置100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃，5% CO2的条件下)。
2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24或48小时)。
3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。
4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
6、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

活力计算：.
细胞活力(％)=[A(加药)－A(空白)]／[ A(0加药)－A(空白)]×100
A(加药)：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白)：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0 加药)：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

注意事项：
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
②白细胞可能需要培养较长时间。
③当使用标准96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1 ,000个/孔 (100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 ( 100 μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10% 加入CCK-8溶液。
④如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片，但是450nm检测灵敏度最高。
⑤培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

储存条件：4℃，有效期一年

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·10×Tris-MOPS缓冲液
编号：QN0122
规格：100mL|500mL
Bis-Tris胶专用缓冲液Tris-MOPS
储存条件：RT

·蜜二糖水合物
编号：QN0144
英文名称：D-(+)-Melibiose Monohydrate
规格：10g|100g
别名：α-D-蜜二糖水合物
CAS号：585-99-9
分子式：C12H22O11
分子量：342.3
储存条件：RT

·5-磷酸吡哆醛
编号：QN0445
英文名称：Pyridoxal 5-phosphate, monohydrate
规格：1g
本品仅用于生化研究，为*基酸脱*酶和脱羧酶的辅酶。

别名：吡多醛-5-磷酸;辅脱羧酶;5-磷酸吡醛素
CAS号：41468-25-1
分子式：C8H10NO6P·H2O
分子量：265.15
储存条件：-20℃
性状：浅黄色粉末

·二硫苏糖醇
编号：QN1112
英文名称：DTT
规格：5g|25g|100g
本品是一种还原蛋白质S-S键的试剂;生化研究用作巯基保护剂;酶的专一性抑制剂;测定酶活力。SDS-PAGE上样缓冲液的配制等。

别名：DTT
CAS号：3483-12-3
分子式：C4H10O2S2
分子量：154.25
纯度：≥97%(滴定)
性状：白色针状或白色颗粒、粉末
储存条件：2～8℃

·二磷酸腺苷 ADP
编号：QN0855
英文名称：Adenosine 5"-diphosphate，ADP
规格：1g
CAS号：58-64-0
分子式：C10H15N5O10P2
分子量：427.2
纯度：(HPLC):≥95.0％
性状：白色或类白色粉末状;无臭
储存条件：-20℃

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