
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
上海信裕生物科技有限公司
- 规格:
10/24盒
外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能,在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子;然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。宇玫博生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于血清、血浆中的外泌体提取,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒,可用于电镜分析、NTA粒径分析、蛋白分析研究等。
产品组成
| 组分名称 | 规格 |
| Blood IsoExo Solution*(BIS) | 100 mL |
| *RNase/DNase Free, Sterile |
1,高速离心机 (可以达到10000 g离心力),2 mL离心转子,1.5 mL离心管;
2,1×PBS缓冲液(无菌);
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)操作规程
一、样品预处理
1,取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;
2,样品初始用量:(单次提取时的样品量)
| 样品名称 | 最低量 | 最高量 |
| 血 清 | 0.2 mL | 1 mL |
| 血 浆 | 0.2 mL | 1 mL |
4,上清液转移:去除细胞碎片的离心上清液转移到新的离心管中;
5,离心去杂质:转移后的上清液于4℃以10000 g离心20 min,去除样品中杂质,将离心后的上清液转移至新的离心管中。
二、外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)提取外泌体
1,上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中加入Blood IsoExo Solution (BIS)试剂,具体的加入剂量如下:
| 样品名称 | 样品剂量 | BIS剂量 |
| 血 清 | 0.2 mL | 1 mL |
| 血 浆 | 0.2 mL | 1 mL |
2,溶液混合:加入ECS试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1 min,再放置于2℃至8℃静置2h;
3,沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管于4℃以10000 g离心60 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒;(注:尽可能吸净上清液)
4,外泌体重悬:取50 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物,待其均匀悬浮在PBS中后,将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中;(建议PBS液加入体积:初始样本体积=1:4)
5,外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12000 g离心2 min,保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒。
6,外泌体的保存:提取后的外泌体保存于-80℃低温冰箱中,以备后继实验使用。
储存条件
本品在室温可稳定保存24个月,使用前请充分混匀。
注 意
本产品仅用于生命科学研究,不得用于医学诊断及其他用途!
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文献和实验远远比常规试剂盒提取高,更好的保留外泌体的活性和形态; 大规模提取是有参考的解决方案的,这两篇文献很好的做了阐释。 关键步骤 [1]: ● 收集条件培养基(CM):收集神经母细胞瘤 N2a 和成肌细胞 C2C12 的培养基,经过低速离心和 0.22 μm 过滤去除大颗粒和细胞碎片。 ● 处理大体积培养基:对于大体积培养基(50 ml 至 200 mL),使用切向流过滤(TFF)系统进行浓缩和透析,然后加载到结合-洗脱分子筛层析(BE-SEC)柱上进行纯化。 ● 分离 EVs:根据 280 nm
外泌体(Exosomes)是细胞分泌到胞外的一种囊泡,大小为 30-150 nm,携带了各种核酸、蛋白质和脂类等物质,可以在不同细胞间进行传递和交流,从而影响受体细胞的生物学功能。 肿瘤细胞来源的外泌体不仅能帮助肿瘤细胞自身发生侵袭和转移,也能促进肿瘤微环境其他细胞的状态发生改变。外泌体在肿瘤中起的作用若要深入研究,这就需要我们拿到更多的肿瘤来源的外泌体。 目前肿瘤方向的研究多使用肿瘤细胞的培养上清来提取外泌体,但是现在我们可以直接利用肿瘤组织来提取外泌体,一方面减少了大量体外培养细胞
培养基,添加新培养基(50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基); 3. 阶段培养二:待细胞在梯度培养一中生长汇合度约为 70~80% 时,移去原有的 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基; 4. 使用 1X PBS 溶液将细胞润洗 2~3 次; 5. 加入外泌体专用无血清培养基继续培养 24~48 h,待细胞汇合度到 90%~100% 时收取细胞培养上清液,该上清液即可用于外泌体提取实验。 *注:若使用 DMEM、1640 等常规培养基,会导致培养的细胞
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