
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
上海信裕生物科技有限公司
- 规格:
10/24盒
外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能,在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子;然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。宇玫博生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于血清、血浆中的外泌体提取,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒,可用于电镜分析、NTA粒径分析、蛋白分析研究等。
产品组成
| 组分名称 | 规格 |
| Blood IsoExo Solution*(BIS) | 100 mL |
| *RNase/DNase Free, Sterile |
1,高速离心机 (可以达到10000 g离心力),2 mL离心转子,1.5 mL离心管;
2,1×PBS缓冲液(无菌);
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)操作规程
一、样品预处理
1,取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;
2,样品初始用量:(单次提取时的样品量)
| 样品名称 | 最低量 | 最高量 |
| 血 清 | 0.2 mL | 1 mL |
| 血 浆 | 0.2 mL | 1 mL |
4,上清液转移:去除细胞碎片的离心上清液转移到新的离心管中;
5,离心去杂质:转移后的上清液于4℃以10000 g离心20 min,去除样品中杂质,将离心后的上清液转移至新的离心管中。
二、外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)提取外泌体
1,上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中加入Blood IsoExo Solution (BIS)试剂,具体的加入剂量如下:
| 样品名称 | 样品剂量 | BIS剂量 |
| 血 清 | 0.2 mL | 1 mL |
| 血 浆 | 0.2 mL | 1 mL |
2,溶液混合:加入ECS试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1 min,再放置于2℃至8℃静置2h;
3,沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管于4℃以10000 g离心60 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒;(注:尽可能吸净上清液)
4,外泌体重悬:取50 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物,待其均匀悬浮在PBS中后,将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中;(建议PBS液加入体积:初始样本体积=1:4)
5,外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12000 g离心2 min,保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒。
6,外泌体的保存:提取后的外泌体保存于-80℃低温冰箱中,以备后继实验使用。
储存条件
本品在室温可稳定保存24个月,使用前请充分混匀。
注 意
本产品仅用于生命科学研究,不得用于医学诊断及其他用途!
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文献和实验外泌体(Exosomes)是细胞分泌到胞外的一种囊泡,大小为 30-150 nm,携带了各种核酸、蛋白质和脂类等物质,可以在不同细胞间进行传递和交流,从而影响受体细胞的生物学功能。 肿瘤细胞来源的外泌体不仅能帮助肿瘤细胞自身发生侵袭和转移,也能促进肿瘤微环境其他细胞的状态发生改变。外泌体在肿瘤中起的作用若要深入研究,这就需要我们拿到更多的肿瘤来源的外泌体。 目前肿瘤方向的研究多使用肿瘤细胞的培养上清来提取外泌体,但是现在我们可以直接利用肿瘤组织来提取外泌体,一方面减少了大量体外培养细胞
显著性最高。 图七 尿液外泌体中的脂类分析 五、以外泌体内蛋白质为标志物: 山东大学附属山东省肿瘤医院宋现让和谢丽课题组发表研究文章[5],揭示了非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清外泌体中的蛋白质可以作为潜在的诊断指标。 本文作者通过分离 46 个健康人和 125 个 NSCLC 患者血清的外泌体,发现与健康组相比,外泌体中 α2-HS 糖蛋白(AHSG)和细胞外基质蛋白 1(ECM1)表达显著升高,再结合肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)同时检测,可以提高诊断准确性。 图八
了外泌体中的脂质、RNA 和蛋白质,还有微囊泡、凋亡小体等囊泡类型的信息。 ExoCarta(http://exocarta.org/index.html)数据库主要收录了包括人、大鼠、小鼠、绵羊、豚鼠、果蝇、马、穴兔、牛在内的几个物种的 286 个研究结果,含蛋白质、mRNA、miRNA 和脂质等信息。 三、如何获得外泌体样本及预处理? 外泌体广泛存在于细胞培养上清以及各种体液中,包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。不同的样本来源,预处理及注意细节均不同,下面
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