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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
上海联迈生物工程有限公司
- 服务名称:
外泌体提取
- 规格:
10
外泌体提取和DNA分离试剂盒(Exosome Extraction & DNA Isolation Kit)结合我们的外泌体提取试剂,能够从细胞培养上清或体液(血清/血浆等)中同时分离外泌体和循环DNA。利用优化的裂解液提取已分离的外泌体DNA,采用吸附柱(Spin Columns)法方便、快捷地纯化、洗脱外泌体DNA,可直接用于下游应用,如real time PCR,Expression Array Assays,NGS等。
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)产品特点:
可获得回收率、高纯度游离DNA和外泌体相关DNA。
操作简单、快捷,不需要额外仪器设备。
可小体积洗脱。
适合后续各种DNA实验,如qPCR或数字
产品应用:
可简单、快速富集各种样本中游离DNA和外泌体颗粒。
可通过DNase I处理降解样本中游离DNA,而外泌体中DNA不受影响,可单独纯化外泌体中DNA。
可应用qPCR或数字PCR检测和发现突变,应用于液体活检。
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)提取的DNA可用于构建文库及测序。
收集临床诊断为肠癌患者,应用“外泌体提取和DNA分离试剂盒”中外泌体提取试剂沉淀血浆中外泌体颗粒,分别经过Dnase I处理和不经过Dnase I处理来区分提取的外泌体相关DNA,应用安捷伦2100 Bioanalyzer测定DNA分布图(图1),从中得出:外泌体提取试剂不仅能富集血浆中外泌体颗粒,同时血浆中游离DNA也能被沉淀下来,经过Dnase I消化,可以降解血浆中游离DNA,但外泌体膜性结构可阻止Dnase I对外泌体内含物DNA消化。以提取的DNA为模板,应用ARMS-PCR技术对KRas突变检测(图2),在KRas突变的肠癌患者中,检测的Ct值较健康人小,同时经过Dnase I处理,可提高肠癌患者与健康人Ct值差值(△Ct)检测的特异性和灵敏度。
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)外泌体提取和DNA/RNA分离纯化方面积累了丰富经验,结合我们的实验条件,可以提供:
1、外泌体的提取和纯化,外泌体定量(NTA和ELISA)。
2、外泌体核酸分离和纯化,外泌体核酸检测(qPCR或NGS)。
3、外泌体蛋白质鉴定,如Western Blot,蛋白质质谱分析等。
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文献和实验远远比常规试剂盒提取高,更好的保留外泌体的活性和形态; 大规模提取是有参考的解决方案的,这两篇文献很好的做了阐释。 关键步骤 [1]: ● 收集条件培养基(CM):收集神经母细胞瘤 N2a 和成肌细胞 C2C12 的培养基,经过低速离心和 0.22 μm 过滤去除大颗粒和细胞碎片。 ● 处理大体积培养基:对于大体积培养基(50 ml 至 200 mL),使用切向流过滤(TFF)系统进行浓缩和透析,然后加载到结合-洗脱分子筛层析(BE-SEC)柱上进行纯化。 ● 分离 EVs:根据 280 nm
外泌体(Exosomes)是细胞分泌到胞外的一种囊泡,大小为 30-150 nm,携带了各种核酸、蛋白质和脂类等物质,可以在不同细胞间进行传递和交流,从而影响受体细胞的生物学功能。 肿瘤细胞来源的外泌体不仅能帮助肿瘤细胞自身发生侵袭和转移,也能促进肿瘤微环境其他细胞的状态发生改变。外泌体在肿瘤中起的作用若要深入研究,这就需要我们拿到更多的肿瘤来源的外泌体。 目前肿瘤方向的研究多使用肿瘤细胞的培养上清来提取外泌体,但是现在我们可以直接利用肿瘤组织来提取外泌体,一方面减少了大量体外培养细胞
显著性最高。 图七 尿液外泌体中的脂类分析 五、以外泌体内蛋白质为标志物: 山东大学附属山东省肿瘤医院宋现让和谢丽课题组发表研究文章[5],揭示了非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清外泌体中的蛋白质可以作为潜在的诊断指标。 本文作者通过分离 46 个健康人和 125 个 NSCLC 患者血清的外泌体,发现与健康组相比,外泌体中 α2-HS 糖蛋白(AHSG)和细胞外基质蛋白 1(ECM1)表达显著升高,再结合肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)同时检测,可以提高诊断准确性。 图八
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