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上海康朗生物科技有限公司
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10
外泌体(Exosome)是直径约为30-150nm,密度在1.13-1.21g/m1的小囊泡。Exosome天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,外泌体是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体 )的膜性囊泡。
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)研究发现,Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质rRNA和microRNA,并且exosome能够通过生物屏障,在细胞间传递功能性核酸分子,从而发挥各种生物学功能。
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)服务内容:
1,外泌体提取服务
从体外培养的细胞中分离和提取exosome的主要方法是超速离心法,这种方法缺点也不少:耗时耗力,往往需要30个小时左右;每次最多只能处理6个样品;需要大量的起始材料;产量不高。
我公司自主开发外泌体快提取试剂盒,快速高效获得高纯度外泌体颗粒。
- 外泌体电镜检测服务
全血,血浆;
细胞上清液;
体液:尿液、心包积液、唾液、脑脊液、腹水等。
用于分离外泌体类型及所需量:
血清样本: 5ml (全血10ml);
血浆样本: 5ml (全血 8-10ml);
无血清培养细胞上清:50ml;
体液: 20ml;
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)外泌体粒径检测服务
来自细胞培养上清液提取的外泌体,通过美国PSS Nicomp 380 Z3000粒度仪检测
3,外泌体基因、蛋白检测分析服务
外泌体microRNA检测分析;
外泌体lncRNA检测分析;
外泌体蛋白表达检测分析;
4,外泌体NSG测序服务
外泌体提取和 DNA 分离(细胞培养上清或尿液)相关产品
外泌体提取纯化试剂盒;
Cd63-GFP真核表达质粒;
Cd63-GFP腺病毒颗粒;
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文献和实验远远比常规试剂盒提取高,更好的保留外泌体的活性和形态; 大规模提取是有参考的解决方案的,这两篇文献很好的做了阐释。 关键步骤 [1]: ● 收集条件培养基(CM):收集神经母细胞瘤 N2a 和成肌细胞 C2C12 的培养基,经过低速离心和 0.22 μm 过滤去除大颗粒和细胞碎片。 ● 处理大体积培养基:对于大体积培养基(50 ml 至 200 mL),使用切向流过滤(TFF)系统进行浓缩和透析,然后加载到结合-洗脱分子筛层析(BE-SEC)柱上进行纯化。 ● 分离 EVs:根据 280 nm
外泌体(Exosomes)是细胞分泌到胞外的一种囊泡,大小为 30-150 nm,携带了各种核酸、蛋白质和脂类等物质,可以在不同细胞间进行传递和交流,从而影响受体细胞的生物学功能。 肿瘤细胞来源的外泌体不仅能帮助肿瘤细胞自身发生侵袭和转移,也能促进肿瘤微环境其他细胞的状态发生改变。外泌体在肿瘤中起的作用若要深入研究,这就需要我们拿到更多的肿瘤来源的外泌体。 目前肿瘤方向的研究多使用肿瘤细胞的培养上清来提取外泌体,但是现在我们可以直接利用肿瘤组织来提取外泌体,一方面减少了大量体外培养细胞
培养基,添加新培养基(50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基); 3. 阶段培养二:待细胞在梯度培养一中生长汇合度约为 70~80% 时,移去原有的 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基; 4. 使用 1X PBS 溶液将细胞润洗 2~3 次; 5. 加入外泌体专用无血清培养基继续培养 24~48 h,待细胞汇合度到 90%~100% 时收取细胞培养上清液,该上清液即可用于外泌体提取实验。 *注:若使用 DMEM、1640 等常规培养基,会导致培养的细胞
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