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标本溶血:
1、脱水、休克等疾病使得穿刺困难而溶血;
2、抽血器质量不合格导致溶血;
3、血清分离不当导致溶血;
4、红细胞有先天或获得性缺陷而易破坏溶血;
5、患溶血性疾病。
溶血的干扰机理:
1、血细胞中浓度远高于血清浓度:血细胞中高浓度物质溢出,测定结果偏高。如K、CK、LDH、AST等,轻度溶血即可有很大影响。
2、血细胞中浓度低于血清浓度:此时溶血相当于血清稀释而结果偏低。如血糖、r-GT等。
、检测大多是检测化学反应前后颜色变化程度来计算待检物浓度。血红蛋白的红颜色会造成干扰。
控制影响因素:
开展常规项目的室内质量控制,绘制质控图和观察室内环境;谨慎使用检测方法学;
在使用某一方法时,先虑标本量是否太少或血清凝固,需重新处理标本进行测定;如果是采用速率法,要考虑是否是酶活力过高;动态反应曲线是否正常,注意有无提示数据报警;
仪器方面,如果发现某一时间的结果全部偏低,就要考虑是否引入了系统误差,是否发生仪器的样品针堵塞,搅拌棒搅拌不均等情况,或样品针注射器漏气,或试剂的交叉污染,或光源灯老化等问题;避免标本的溶血或脂血现象。
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文献和实验反应。常用偶氮色素法显示非特异性酯酶活性,其原理如下:在酶的作用下,底物分解游离出来。―萘酚,后者与重氮盐偶联形成偶氮色素,同时沉着于酶存在部位,通过偶氮色素的显色,间接证明酶存在部位。α―萘酚系统的物质可用重氮盐中坚牢蓝B、监牢蓝RR、监牢红RC盐,而萘酚AS系统的物质则用石榴石、可林思LB盐、固蓝B、固红RC、固红紫LC等。反应式如偶氮色素法显示非特异性酯酶反应原理 (1)孵育液配制 α―醋酸萘酚 10mg 丙酮
分钟; 27)缓冲液B清洗2次,每次5分钟; 28)制成NBT/BCIP暗处保存30-60分钟,显微镜下进行观察,如果背景尚佳,显色时间可延长到16小时; 29)停止缓冲液B的反应,用水进行简单的清洗; 30)固红,脱水以及封片进行核的复染。 2、使用地高辛标记的寡核苷酸探针进行石蜡切片的原位DNA杂交第一天 1) 二甲苯于37℃脱蜡2次,每次15分钟; 2) 无水乙醇浸泡2次,每次5分钟; 3) 95%乙醇浸泡2次,每次5分钟; 4) PBS清洗5分钟;
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