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- 2025年07月14日
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- 详细信息
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- 技术资料
- 库存：
44
- 英文名：
T4 RNA Ligase
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海抚生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
详见说明书
GR：优级纯。主成份含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质.
AR：分析纯。主成份含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。
CP：化学纯。主成份含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。
LR：实验纯。主成份含量高、纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。
BR：生化试剂。用于配制生物化学检验试液，和生化合成。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂和有机合成。
BS：生物染色剂。适用于配制生物标本染色液。质量指标注重生物活性杂质。可替代指示剂和有机合成。
Ind：显色剂。
HPLC：适用于高压液相色谱的试剂。
T4 RNA连接酶
英文名称：T4 RNA Ligase
分子量：43.6kDa，单体
级别：BR
来源：含有T4噬菌体克隆基因63的大肠杆菌
浓度：10u/ul
活性定义：是指在37℃、30分钟内将1nmol 5'-[32P]-(A)12-18转化为磷酸酶抗性形式所需的酶量
酶活性分析混合物：50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 10uM 5'-[32P]-(A)12-18(10uM 5'-末端）
保存液组分：20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA，0.5mM ELUGENT变性剂和50%(v/v)甘油
10×反应缓冲液：500mM HEPES-NaOH(PH8.0，25℃), 100mM MgCL2, 100mM DTT
抑制剂：金属螯合剂、SH基团修饰试剂
失活：70℃加热10分钟
质量控制：测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染
备注：反应体系中ATP的浓度取决于连接反应的类型，推荐的BSA反应浓度是0.1mg/ml
性状(以下信息仅供参考)：重组酶，催化ATP依赖的分子内和分子间磷酸二酯键连接（5'-磷酸基团和3'-羟基末端），底物分子为多聚核苷酸、寡核苷酸、ssRNA和ssDNA，分子之间的最小的连接底物是核苷3'，5'-二磷酸，而分子内连接的最小底物是8个碱基的寡核苷酸。配套提供反应缓冲液、ATP和BSA溶液。催化3'→5'磷酸二酯键的形成，使核苷酸的5'-磷酸末端和5'-羟基末端连接。作用底物包括单链RNA、DNA及二核苷焦磷酸。随酶提供10X 反应缓冲液
用途：本品仅供科研，不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)连接RNA和RNA ；RNA3'-末端标记胞嘧啶3'，5'-双[a-32P]磷酸； tRNA的特异性修饰；合成寡核苷酸的环化；寡聚脱氧核糖核苷酸与单链cDNA连接，用于5'RACE（快速扩增cDNA末端）分析
保存：-20°C
T4 RNA连接酶优质的仪器用水
优质的仪器用水是使用好检验试剂的一个十分重要环节之一。因为测定离子类的项目：比如铜、铁、锌、Mg、磷。
这些项目在使用过程中，仪器用水的质量相当重要，虽然现在一般医院的生化仪都带有制水系统，但制水系统基本都是制备去离子水，离子交换树脂在使用一段时间后交换能力明显下降，需要定期进行更换，否则制备的水离子含量多，电导率偏高。使用含离子超标的水冲洗仪器，直接影响检验结果。再如二氧化碳项目，如果水质不好，仪器用水中本身含二氧化碳就很高，则检测该项目的结果也会受到严重的影响。还有如果血清中含有GLDH，而仪器用水存在时，可消耗NADH，使利用NADH的酶联连续监测法结果偏高。解决办法：定期监测水质，当仪器用水的电阻小于1．0MQ时要更换离子交换树脂或活性炭。
2 标本的及时分离及测定
标本的及时分离及测定是用好检验试剂的首要环节因为凡是利用NADH转化为NAD 变化率来检测其物质含量的试验都或多或少受到血液存放时间的影响。原因是全血存放时间越长，红细胞利用血清中的糖进行无氧酵解产生酸使NADH转化为NAD ，这样使测定结果假性升高。解决办法：①作好与临床的沟通，对抽血人员和标本运送人员(传递人员)进行培训；② 及时分离血清并及时检测；③ 也可将全自动生化分析仪上的延迟时间设置大于60秒，这样试剂在延迟期内消除酸的干扰，可完全避免假阳性结果的出现。
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T4 RNA连接酶混成单一试剂的问题
比如酶法肌酐试剂，第一步R1中的酶要消除样品中内源性肌酸的干扰，如果混成单一试剂，则会使检测结果偏高，消除法HDL、LDL也不能混成单一试剂，因为它们都要分别清除HDL和LDL以外的脂蛋白，从而达到检测的目的，如果混成单一试剂，则会使测定的HDL和LDL不准确。另外，有的试剂混成单一试剂后，稳定性和抗干扰能力也会明显下降。解决办法：①在仪器通道或试剂位允许的情况下尽量使用双试剂；②如一定要使用单一试剂，最好选择试剂厂家针对部份项目专门生产好的单一试剂。
T4 RNA连接酶试剂开瓶的问题:
随着全自动生化分析仪的普及，“开瓶稳定性”也随之受到了大家的重视，但是就目前有的试剂方法学来讲，还达不到人们所要求的试剂开瓶后在仪器内放很长时间不需要定标，比如ALP、TP、GSP等PH为碱性的试剂，开瓶后试剂会吸收空气中的二氧化碳，使试剂本身的PH值下降，如果长时间开瓶不定标或校准，会使检测结果发生偏离，在国外有的项目有明文规定，必须72小时之内定标，比如BUN。但是在国内的某些实验室为了方便，很长时间都不作校准，导致测定结果的不准确。解决办法：了解试剂的特性，及时对部份项目进行校准，对于每天标本量不多的医院，可按1～2天的用量取用试剂放入仪器。
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文献和实验相关专题 重组DNA技术工具酶 T4 DNA Ligase即T4 DNA连接 酶，可以催化粘端或平端双链DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需ATP作为辅助因子。同时T4 DNA连接酶可以修补双链DNA、双链RNA或DNA/RNA杂合物上的单链缺刻(single-strand nicks)。
【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
因为看到园子中使用NEB T4 DNA连接酶的老师和同学比较多，也经常就一些连接的问题进行讨论和沟通。今天发一个关于NEB T4 DNA连接酶的一个专题，就使用过程中一些常见问题跟大家讨论一下。也希望各位老师同学能够踊跃参与，如果大家有什么疑问或者好的建议欢迎。 一、关于NEB M0202 T4 DNA 连接酶的使用方法和常见问题及解答 1、产品特性和使用方法 产品说明：该酶催化契合的双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑
使RNA的 3′－ OH末端与 5′ - 磷酸末端以磷酸二酯键而连结的酶。 EC 6． 5． 1． 3．是 J． Hurwitz等（ 1972）从感染 T4 噬菌体的大肠杆菌中提取的，与促进该噬菌体尾部纤维结合的基因 63的蛋白质为同一物质。作为其反应机理，首先是酶与 ATP形成酶 - AMP复合体，复合体的 AMP与 RNA的 5′ - 磷酸末端形成焦磷酸键，它与 RNA的 3′－ OH末端形成磷酸二酯键将 AMP游离出。一个 RNA链的 5′与 3′末端结合则生成一个环状分子。对基质
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