T7 DNA聚合酶

T7 DNA聚合酶
英文名称：T7 DNA Polymerase  
分子量：由2个亚基组成，804kDa多肽（T7噬菌体基因5表达产物）和12kDa硫氧还蛋白（大肠杆菌trxA基因表达产物）  

级别：BR  
来源：两个大肠杆菌菌株，一个菌株含有T7噬菌体克隆基因5，另一个菌株含有大肠杆菌克隆基因trxA  
浓度：10u/ul  
活力定义：在37°C条件下，30分钟内能使10 nmol 的脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸片段（吸附在DE-81上）所需的酶量  
酶活性分析混合物：40mM Tris-HCL(PH7.5), 1mM DTT, 10mM MgCL2, 0.1mg/ml BSA, 0.033mM各种dNTP,0.4MBq/ML(3H)-dTTP和0.5mM碱性变性的牛胸腺DNA  
保存缓冲液组分：20mM 磷酸钾(PH7.4), 0.1mM EDTA, 1mM DTT和50%(v/v)甘油  
10×反应缓冲液：400mM Tris-HCL(PH7.5，25℃), 100mM MgCL2, 10mM DTT  
抑制剂：金属螯合剂，修饰试剂（无水醋酸和N-乙基顺丁烯二酰亚胺可使3'→5' 外切核酸酶失活，但不影响聚合酶活性  
失活：75℃加热10分钟  
质量控制：测试表明无内切脱氧核糖核酸酶污染  
使用注意：37℃分析时需要短时间孵育  
性状(以下信息仅供参考)：悬浮液，重组酶。T7 DNA聚合酶是一种模板依赖型DNA聚合酶，催化5'→3'方向的DNA合成。该DNA聚合酶具有高持续合成能力，可持续合成长片段DNA。该酶对单链和双链DNA具有3'→5'外切核酸酶活性  
用途：本品仅供科研，不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)除去残留的基因组DNA，纯化共价闭环的DNA分子；长片段引物延伸反应；DNA 3'-末端标记；定点突变位点的链延伸反应；DNA 5'-突出点位补平；第二链cDNA合成；原位检测凋亡相关DNA片段  
保存：-20°C  
T7 DNA聚合酶各位从事科研工作的小伙伴们，实验中所用到的试剂、配制试剂的液体，有时可能是实验成败的关键，因此大家在使用时一定要留意各种试剂的级别。原则上讲，纯度越高越好，但是价格也就越高，所以要根据各自的需要选择合适的品质，避免不必要的浪费！
T7 DNA聚合酶试剂间可能发生的干扰情况
1.ALT（IFCC）、AST（IFCC）试剂中含有高活力LD成分，有可能会对LD的测定带来干扰；
2.ALP（IFCC）、CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）、CO2（PEPC）、α-Amy(EPS)等试剂中使用缓冲液，可能会对其后的Mg2+ 测定带来干扰；
3.ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、 UA(Uricase)、 α-HBDH(DGKC)等试剂使用缓冲液，可能会对无机磷的测定带来干扰； 
4.CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）试剂中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反应过程，因此可能对Glu测定带来干扰，尤其对Glu的HK法测定可能带来严重干扰；
5.Mg2+试剂 (Calmagite)中含有EGTA成分，为Ca2+络合剂，可能对Ca2+的测定带来干扰； 
6.个别试剂以甘油做酶的保护剂，因此可能对TG的测定带来干扰，等等； 
7.低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇的试剂成分中都含有CE、CHOD、POD酶，都会与血清成分反应，生成的中间反应产物是H2O2浓度,因为低密度脂蛋白和甘油三酯检测单位都是mmol/L级,而尿酸检测单位是μmol/L级,二者之间相差1 000倍,故检测尿酸的反应杯中只要残留极少量的低密度脂蛋白和胆固醇试剂就可产生大量的H2O2,直接导致尿酸的检测结果的升高；
8.葡萄糖对尿酸试剂的干扰GLU(OX)与UA测定原理均采用Trider's反应方法,试剂探针残留携带的GLU带入到UA反应体系,发生血糖反应其产物红色醌亚胺与UA产物红色醌亚胺颜色叠加,而血清中正常血糖含量远高于尿酸水平,从而导致UA结果严重偏高； 
9.胆固醇(TC)、甘油三醋(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL) 会对总胆汁酸检测的影响，导致胆汁酸测定值增加。这些试剂中为了保证反应充分，往往含有胆酸钠成分或是一些脂类水解促进剂等，这些物质导致了样本胆汁酸测定的携带性增高及内源产物等副反应性增高； 
10.谷丙中的含有的酮戊二酸NADH反应体系会干扰总胆汁酸检测中的Thio-NAD－Thio-NADH循环指示体系，导致测定值偏低；
由于各个试剂公司所提供的产品说明书常不能全面反映试剂的组成情况，所以通过实验发现试剂交叉污染可能带来的干扰变得很重要。下面以两个试验来加以说明: 
A.将试剂作为样本进行全套项目测定，根据结果确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目。  
B.将一份样本分为两份，一份加生理盐水或其他适当的稀释液，另一份加等量的试剂，同时测定、考察结果的变化，进而确定可能发生试剂交叉污染时造成干扰的项目。进行这一实验时，使用半自动生化分析仪可能会得到更为理想的结果，尤其是针对双试剂反应时， R1、R2加入时机可以得到更为精确的控制。 
此外，由于试剂成分的复杂多样性，实时仪器状况的独特性，可能发生的试剂间的交叉污染的情况不尽相同。
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T7 DNA聚合酶试剂间的干扰原因：
试剂中含有下一测试所要测定的底物，或是含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而直接干扰下一反应的测定结果；
该试剂所引导的反应对下一项目的反应进程带来了间接的干扰，因为在有试剂污染的情况下，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。下面通过对试剂成分的分析和相应试验来找出试剂交叉污染可能带来的情况，进而指导相应的项目调整和结果分析