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如何保证生化检测结果的准确:
1. 室内质控:
开展常规项目的室内质量控制,绘制质控图和观察室内环境;
2.谨慎使用检测方法学:
在使用某一方法时,先虑标本量是否太少或血清凝固,需重新处理标本进行测定;如果是采用速率法,要考虑是否是酶活力过高;动态反应曲线是否正常,注意有无提示数据报警;
3.仪器因素:
仪器方面,如果发现某一时间的结果全部偏低,就要考虑是否引入了系统误差,是否发生仪器的样品针堵塞,搅拌棒搅拌不均等情况,或样品针注射器漏气,或试剂的交叉污染,或光源灯老化等问题。
4.标本状态:
避免标本的溶血或脂血现象。
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文献和实验DNA 样品,将未甲基化的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U)。重亚硫酸盐处理不会影响甲基化的胞嘧啶(m5C) 。为了检测甲基化位点,一对引物经设计带有鸟嘌呤(G),可与目标序列中的 m5C 配对;为了检测未甲基化位点,另一对引物带有腺嘌呤(A),可与重亚硫酸盐转化分子中的U配对(随后,与后续 PCR 循环中的胸腺嘧啶(T)配对)。通过引物配对得到的阳性 PCR 扩增结果可用于确定位点的甲基化状态(图 7)。 图 7.甲基化特异性 PCR 第一步,使用重亚硫酸盐处理 DNA 样品,将未甲基化的胞嘧啶转化
甲基化及CpG岛 DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一,可能存在于所有高等生物中。DNA甲基化能关闭某些基因的活性,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。甲基化的主要形式有5-甲基胞嘧啶,N6-甲基腺嘌呤和7-甲基鸟嘌呤。原核生物中CCA/TGG和GATC常被甲基化,而真核生物中甲基化仅发生于胞嘧啶。 DNA的甲基化是在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶转变为5'甲基胞嘧啶。这种DNA修饰方式并没有改变基因序列,但是它调控了基因的表达[3]。脊椎动物基因的甲基
(至少室温放置30min)无菌的40% detrose贮液。 (3)YPAD(斜面)培养基(可用于保菌或培养营养缺陷菌株,100mL) 在YPD液体培养基中加入硫酸腺嘌呤(Adenine hemisulfate salt,腺嘌呤半硫酸盐)40mg,琼脂(Bacto-agar)(液体培养基不加)2g。加ddH2O至90mL,调pH值至5.8(液体调至4左右),定容至95mL,高温灭菌(121℃,15min)。待温度降至55℃时,加入5mL预热(至少室温放置30min)无菌的40
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