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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海邦景
- 库存:
大量
- 靶点:
ADAM32
- 克隆性:
多克隆
- 抗体英文名:
Anti-ADAM32
- 抗体名:
去整合素样金属蛋白酶32抗体
- 标记物:
HRP/AKP等
- 宿主:
人、小鼠、大鼠、兔等
- 适应物种:
人、小鼠、大鼠、兔等
- 亚型:
IgG
- 形态:
液体或固体
- 应用范围:
WB IHC-P IHC-F IF
- 保存条件:
低温冻存
- 规格:
100ul
英文名:Anti-ADAM32
价格:电询
我司提供各种科研所需的抗体,包括一抗、二抗、抗原,单克隆抗体、多克隆抗体以及标记抗体等,同时我们也提供定制服务以及抗体标记服务,具体详情可点击这里咨询!
免疫-PCR技术:
1、基本原理
免疫-PCR主要由两个部分组成即类似于普通酶联免疫吸附实验(ELISA)的抗原抗体反应和常规的PCR扩增和电泳检测。以一段特定的双链或单链DNA来标记抗体,用PCR扩增抗体所连接的DNA,并进行电泳检测,因此可由PCR产物的量来反映抗原分子的量。免疫-PCR结合了抗原抗体反应的特异性和PCR的高度敏感性,成为一种极为敏感的抗体依赖的抗原检测技术。
2、免疫-PCR的改进
将不同的抗体标上特异的DNA序列,形成一种新的、基于双抗夹心免疫模式的免疫-PCR,并可同时检测多种抗原,避免了免疫实验敏感性的限制和在一个实验中检测抗原的种类。免疫-PCR夹心模式可以用常规的免疫实验完成。这样就大大降低了原先免疫-PCR实验的复杂性,并减少了大量的操作时间。这种免疫-PCR系统的关键改进就是用异双功能化学关联剂制备标记DNA-抗体偶联物。
3、多分析物免疫-PCR
去整合素样金属蛋白酶32抗体制备过程如下:
(1)氨基修饰寡核苷酸与SATA反应,形成乙酰硫代乙酰修饰DNA。
(2)Sulfo-SMCC与抗体反应,形成马来酰亚胺修饰抗体。
(3)混合马来酰亚胺修饰抗体和乙酰硫代乙酰修饰DNA,并加入羟胺盐酸,在黑暗条件下反应,使抗体和标记DNA偶联。
(4)反应混合物用HPLC凝胶过滤纯化偶联物,收集的偶联物在4℃下保存。
在多分析物免疫-PCR实验中,几千个bp的dsDNA可以通过生物学和生物化学方法制备。通过PCR和单向缺失在以Puc18为基础的重组质粒上制备了各种长度、具有相同引物序列的的dsDNA,选择适合长度的dsDNA作为特异性抗体的标记物。而且dsDNA比ssDNA具有更高的稳定性。此外,长链DNA分子更容易用荧光标记和光吸收检测,并且可以引入更多的非同位素标记,序列长度的提高可以促进杂合检测。
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文献和实验常用蛋白酶抑制剂 抑制剂靶蛋白酶有效浓度储藏溶液注解Antipain木瓜酶和胰酶50μg/ml1mg/ml水溶液对胰凝蛋白酶,胃液素,纤溶酶无影响APMSF胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶10-40μg/ml或10-20μM100mmol/L水溶液毒性比PMSF低,不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰胆碱酯酶抑肽酶丝氨酸蛋白酶0.06-2μg/ml10mg/mlPBS溶液避免反复动冻融抑氨肽酶B氨基肽酶40μg/ml溶于甲醇不能抑制羧肽酶Calpain抑制剂Ⅰ、ⅡCalpain (钙依赖性半胱氨酸蛋白酶)Ⅰ:17
【求助】关于培养中细胞的基质金属蛋白酶(MMPs)的检测问题
topicare 逼人行将做一个关于基质金属蛋白酶(MMPs)的实验,阅读了一些文献,发现MMPs的功能较多,其中一个重要的作用就是在恶性肿瘤的侵袭和转移中发挥重要作用。此外MMPs的多水平调节也相当复杂,但是,目前已有的研究表明激素、生长因子、癌基因和细胞周期素均可影响MMPs的转录,其中IL-1、IL-12、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子α(TGFα)、肿瘤坏死因子α(TNFα)均能上调MMPs的表达,而转化生长因子β
的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定,必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属
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