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标本溶血:
1、脱水、休克等疾病使得穿刺困难而溶血;
2、抽血器质量不合格导致溶血;
3、血清分离不当导致溶血;
4、红细胞有先天或获得性缺陷而易破坏溶血;
5、患溶血性疾病。
溶血的干扰机理:
1、血细胞中浓度远高于血清浓度:血细胞中高浓度物质溢出,测定结果偏高。如K、CK、LDH、AST等,轻度溶血即可有很大影响。
2、血细胞中浓度低于血清浓度:此时溶血相当于血清稀释而结果偏低。如血糖、r-GT等。
、检测大多是检测化学反应前后颜色变化程度来计算待检物浓度。血红蛋白的红颜色会造成干扰。
控制影响因素:
开展常规项目的室内质量控制,绘制质控图和观察室内环境;谨慎使用检测方法学;
在使用某一方法时,先虑标本量是否太少或血清凝固,需重新处理标本进行测定;如果是采用速率法,要考虑是否是酶活力过高;动态反应曲线是否正常,注意有无提示数据报警;
仪器方面,如果发现某一时间的结果全部偏低,就要考虑是否引入了系统误差,是否发生仪器的样品针堵塞,搅拌棒搅拌不均等情况,或样品针注射器漏气,或试剂的交叉污染,或光源灯老化等问题;避免标本的溶血或脂血现象。
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文献和实验4 OH调上述提取液至pH 7.2(此时,等电点接近7.2的一些杂蛋白溶解度小,从溶液中沉淀下来),静置30~40分钟中后过滤,所得滤液准备通过人造沸石柱进行吸附。 ⑷ 吸附与洗脱: 人造沸石容易吸附细胞色素C,吸附后能被25%的硫酸铵洗脱下来,利用此特性将细胞色素C与其它杂蛋白分开。具体操作如下: ①人造沸石的预处理:称取人造沸石11g,放入500m1烧杯中,加水搅拌,用倾泻法除去12秒钟内不下沉的过细颗粒。 ② 装柱:选择一个底部带有滤膜的干净的玻璃柱(2.5×30
000);胰凝乳蛋白酶原(Mr 25 000);细胞色素c(Mr 12 800)各10mg,分别放在各称量瓶中;各瓶加入N-乙酰酪氨酸乙酯饱和溶液0.5mL,使混合物溶解后分别上柱。 样品上柱是实验成败的关键之一,若样品稀释或上柱不均,会使区带扩散,影响层析效果。上样时应尽量保持床面的稳定。先打开柱的出口,待柱中洗脱液流至距床表面1~2mm时,关闭出口,用滴管将样品慢慢地加至柱床表面,打开出口并开始计算流出体积,当样品滲入床中接近床表面1mm时关闭出口,同加样品时一样小心地加入少量洗脱
3,3, ―二氨基联苯胺-4-盐酸盐 5mg 0.2mol/L磷酸缓冲液(pH 7.4) 5ml 过氧化氢酶C―100 lmg 细胞色素CⅢ型 10mg (2)操作程序 ①新鲜或固定组织冰冻切片,厚5~10um; ②孵育液中37℃孵育40~60分钟,充分洗涤; ③复染:亚甲蓝染核; ④甘油明胶封片。 (3)结果 酶活性部位呈棕褐色沉淀,细胞内线粒体数目多者酶活性强
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