- ¥180 - 1850
- YBscience
- YB07236
- 进口/国产
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
EHA105 Electroporation Competent Cell
- 保质期：
三年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
10×100ul / 20×100ul
| 编号 |
名称 |
规格 |
| YB07236 |
EHA105电击/电转/转感受态细胞 |
10×50ul |
EHA105电击/电转感受态细胞基因型：
C58 (rifr) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine
EHA105电击/电转感受态细胞说明：
EHA105菌株由EHA101菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。EHA105菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。唯地生物开发的EHA105电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pCAMBIA2301质粒(size:11633 bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA；经pCAMBIA2301-ZH质粒（size:40 kd）检测转化效率可达5×103 cfu/μg DNA。
EHA105电击/电转感受态细胞操作方法：
1. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5 μg质粒DNA（质粒体积不大于6ul，最好用试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用。
3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700μl无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天（当平板只含有50 μg/ml kan 时，28℃培养48 h即可；平板中同时加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需28℃培养60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h）。
EHA105电击/电转感受态细胞注意事项：
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失，但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
EHA105电击/电转感受态细胞保存条件： -80℃
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文献和实验>5 x 109 转化子/μg 超螺旋DNA转化效率的化学法超级感受态细胞正是克隆获得大质粒、连接DNA克隆和建库时最值得推荐的. 电转化感受态细胞 Stratagene的电转化感受态细胞特别耐受电击处理,方便好用,在DNA材料极珍贵、量少时,或构建有代表性文库时,建议采用电转化感受态细胞.ElectroTen-Blue®细胞是目前商品化的电转化感受态细胞中效率最高的,达到>3 x 1010 转化子/μg 超螺旋DNA.此外XL1-Blue,XL1-Blue MRF’,SURE®,ABLE®
菌基因型，并使细胞生长加快（当天获得菌落），已经成功应用于25kb超螺旋DNA和8kb连接DNA的克隆。XL10-Gold®，BL21-Gold，BL21-CodonPlus®，SoloPack® Gold 和96Pack® Gold等系列细胞都带有这个新的性状。超级感受态细胞Stratagene提供多种>5 x109 转化子/μg 超螺旋DNA转化效率的化学法超级感受态细胞正是克隆获得大质粒、连接DNA克隆和建库时最值得推荐的。电转化感受态细胞Stratagene的电转化感受态细胞特别耐受电击处理
的电转化感受态细胞特别耐受电击处理，方便好用，在DNA材料极珍贵、量少时，或构建有代表性文库时，建议采用电转化感受态细胞。ElectroTen-Blue®细胞是目前商品化的电转化感受态细胞中效率最高的，达到>3 x 1010 转化子/μg 超螺旋DNA。此外XL1-Blue，XL1-Blue MRF’，SURE®，ABLE® 和TG1等细 胞也提供电转化形式感受态细胞。SURE® －克隆不稳定 DNA 大肠杆菌DNA修复系统会针对重复序列、二级结构（如Z-DNA）等真核DNA进行重排或删除
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