- ￥420
- 南京万木春生物
- 国产
- BC307-01
- 2026年04月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
零下70℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
EHA105 农杆菌电转感受态细胞
- 库存：
大量
- 供应商：
南京万木春生物
- 规格：
50μl ×20
EHA105 农杆菌电转感受态细胞
产品组成：
组成 BC307-01
EHA105 Electrocompetent cells 20×50μl
pCAMBIA2301 (10ng/μl) 1 支
储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。
基因型：C58 (RifR ) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) (StrR ), Succinamopine type
产品说明：
EHA105由EHA101菌株改造而来(Hood et al., 1993)，为农杆菌C58型背景，核基因中含有利福平抗性基因
(Rif)。此菌株还携带一种自身转运功能丧失的质粒(disarmed Ti plasmid)。EHA105菌株含有胭脂碱型Ti质粒
pEHA105 (pTiBo542DT-DNA),该质粒含有vir基因(vir基因是TDNA插入植物基因组所必需的元件，pEHA105
(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可辅助植物双元表达载体的T-DNA的转移）。
pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒还含有Str抗性基因，赋予EHA105菌株链霉素抗性。EHA105农杆菌适用于水
稻、烟草等植物的转基因操作。EHA105电转感受态特别适用于大质粒的转化，经pCAMBIA2301质粒检测转化
效率大于10 5 cfu/μg DNA。
操作方法：
1. 电极间距为0.1cm的电转杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation cuvettes）插入碎冰中，压实冰
面，冰中静置5分钟，使电转杯充分降温。（电转杯重复使用方法：每次用完后，用大量的自来水冲洗
干净去掉菌液和DNA，用蒸馏水洗3遍，将其泡在75%乙醇中30分钟，取出杯子，沥干液体，放在超净
台中，使乙醇充分挥发，盖上盖子放干燥地方备用。）
2. 取-70℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入10ng-1μg质粒DNA（洗脱或溶解质粒的
溶液中离子不能太高，可用双蒸水稀释。第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的最佳量），用手
拨打管底混匀，立即插入冰中，在超净台中用无菌吸头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上
杯盖，空管保留待用。
3. 启动电转仪，设置电击参数：C=25μF，PC=200ohm，V=2.4KV（此参数为BioRad公司推荐，依据不同
电转仪设置针对农杆菌合适的电击参数）。用纸巾擦掉电转杯外部的水分，将电转杯快速放入电转槽
中进行电击步骤。电击完成后，将电转杯快速插入冰中，加入700μl无抗生素的LB并转移到原来保留的
感受态空管中，28℃，150-200 rpm，振荡培养2-3小时。
4. 6000rpm离心一分钟收菌，留取200μl左右上清轻轻吹打重悬菌块，取100μl的菌液涂布于含相应抗生素
的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天（当平板只含有50μg/ml Kan时，28℃培养48小时即
可；平板中同时加入50μg/ml Kan，20μg/ml Rif时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50μg/ml Rif
则需要28℃培养72-90小时）。
注意事项：
1. 混入质粒时应轻柔操作，加入质粒的体积不大于感受态体积的1/10，质粒不纯或超大质粒会导致转化效
率急剧下降。
2. 平板上菌落过多时，菌落很小。为了获得大的菌落，应减少质粒用量或减少涂布量，或将菌落转移到
新平板上生长。
3. 利福平使用的工作浓度浓度不应高于25 μg/ml，过高的利福平浓度会降低生长速度和转化效率。
4. 利福平具有防止杂菌生长筛选农杆菌的作用；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti 质
粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时可不考虑添加链霉素或庆大霉素，
Ti质粒丢失的概率极低 (可忽略)。
Hood EE, Gelvin SB, Melchers S, Hoekema A (1993) New Agrobacterium helper plasmids for gene transfer to
plants (EHA105). Trans Res 2:208-218
E 、感受态细胞 | |||
| E-1 、大肠杆菌克隆感受态细胞 | |||
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 单位 |
| BC101-01 | TOP10 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC101-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC102-01 | DH5α 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC102-02 | DH5α 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
| BC103-01 | JM109 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC103-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC104-01 | XL1-Blue 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC104-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC105-01 | Mach 1-T1 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC105-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC117-01 | Turbo 感受态细胞 | 100ul ×10 | 包 |
| BC117-02 | 100ul ×20 | 包 | |
| BC118-01 | Stable 感受态细胞 | 100ul ×20 | 包 |
| BC106-01 | DH10B 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC106-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC107-01 | OmniMAX2-T1 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC107-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC108-01 | Stbl3 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
| BC115-01 | Stbl4 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
| BC109-01 | XL10-Gold 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
| BC110-01 | JM110 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
| BC111-01 | DB3. 1 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
| BC112-01 | DH10BAC 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
| BC113-01 | NEB 10-beta 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
| BC114-01 | BJ5183-AD- 1 感受态细胞 | 100μl ×20 | 包 |
| E-2 、大肠杆菌表达感受态细胞 | |||
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 单位 |
| BC201-01 | BL21(DE3) 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC201-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC202-01 | BL21(DE3) pLysS 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC202-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC203-01 | M15 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC203-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC204-01 | Rosetta(DE3) 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC204-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC205-01 | OrigamiB(DE3) 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC205-02 | 100ul ×20 | 包 | |
| BC206-01 | T7 表达感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC206-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC207-01 | T7pLysY 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC207-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC208-01 | Shuffle T7-K12 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC208-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| BC209-01 | Shuffle T7-B 感受态细胞 | 100μl ×10 | 包 |
| BC209-02 | 100μl ×20 | 包 | |
| E-3 大肠杆菌电转感受态细胞 | |||
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 单位 |
| BC401-01 | NEB 10-beta 电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
| BC402-01 | BJ5183 电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
| BC403-01 | BJ5183-AD- 1 电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
| BC404-01 | TOP10 电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
| BC405-01 | DH5α 电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
| E-4 农杆菌感受态细胞 | |||
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 单位 |
| BC301-01 | LBA4404 农杆菌感受态细胞 | 100ul ×20 | 包 |
| BC302-01 | AGL1 农杆菌感受态细胞 | 100ul ×20 | 包 |
| BC303-01 | EHA105 农杆菌感受态细胞 | 100ul ×20 | 包 |
| BC304-01 | GV3101 农杆菌感受态细胞 | 100ul ×20 | 包 |
| E-5 、农杆菌电转感受态细胞 | |||
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 单位 |
| BC305-01 | LBA4404 农杆菌电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
| BC306-01 | AGL1 农杆菌电转感受电转态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
| BC307-01 | EHA105 农杆菌电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
| BC308-01 | GV3101 农杆菌电转感受态细胞 | 50μl ×20 | 包 |
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文献和实验EHA105 农杆菌电转感受态细胞
一．农杆菌感受态细胞的制备 （同大肠杆菌质粒DNA的提取），然后将其转化大肠杆菌，再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养2天。挑单菌落接种于5ml YM（0.5g/L KH2 PO4 ,10 g/L Mannitol,2 g/L L-Glutamine,0.2 g/L NaCL,0.2 g/L MgSO4 ,0.3 g/L Yeast extract,PH7.0）液体培养基中，220rpm，28℃振荡培养18 hr
试剂准备： LB培养基: 500mL 双蒸水：600mL 高压灭菌 预冷 10%甘油：1000mL 预冷 250ml离心杯：高压灭菌 预冷 50mL离心管数个，250mL摇瓶4个，1.5mL EP管 高压灭菌 制备步骤： 1、接种原代菌（DH5α或DH10B），次日挑取单菌落，放入1mL LB培养基中，37℃，300rpm，6 hr
双元载体的农杆菌转化1.1农杆菌感受态细胞的制备1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养。1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。1.1.4. 转入无菌离心管，5000rpm离心5min,去上清液。1.1.5. 加入10ml预冷的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置
技术资料
