细菌样本RNA稳定液

不同样本破碎和匀浆中常见问题及解决方案

的要求，简化加速实验流程，同时结合高效的交联逆转步骤，提高核酸的回收效率与质量。   病毒样本 低滴度和高度的二级结构导致产量低和下游分析困难；复制时容易发生突变。 解决方案 1. 尽可能使用新鲜的样本，或冻融次数不超过一次，多次反复冻融会导致病毒载量下降。 2. 在分离 RNA 之前，通过超速离心、超滤或沉淀浓缩病毒颗粒。 3. 在 RNA 纯化时添加载体 RNA，如 QIAGEN Carrier RNA（货号：1068337）。   细菌样本 高度不稳定，mRNA 很容易快速降解。 解决

PCR 抑制物的来源与一般作用机制

。DNA 的一级结构不稳定，会因为水解、非酶甲基化、氧化损伤和酶降解等出现降解。 细胞中存在核酸酶，如果核酸酶处理不干净，残留在纯化的核酸样本中，从而降解靶核酸。微生物如细菌产生的限制性内切酶也会是一个降解 DNA 的因素。有些细菌的 DNA 酶属于热稳定的核酸酶，在扩增中期可水解基因组和引物 DNA。 核酸和引物也因为其不能与 DNA 聚合酶结合而出现不扩增。如蛋白质、多糖、细胞碎片、脂类等对 PCR 的抑制作用，很可能就是通过对 DNA 的物理包裹作用而使其不能与聚合酶接触。 乳胶

结果分析篇

原理：盐类多糖及有机溶剂、蛋白、酚类分别在波长 230nm、280nm、270nm 处有最高的吸收峰，核酸在 260nm 处有最高的吸收峰。 因此，可以根据吸收峰对应的数值来对核酸进行定量与纯度检测。以质粒 DNA 为例，A260/A280 应该在 1.8-2.1 之间，如果低于 1.8，则有可能样品中有蛋白质等杂质污染，如果高于 2.1，则有可能有 RNA 污染；而 A260/A230 比值应≈2.0，如果低于 2.0，则有可能样本中有盐类或有机溶剂杂质污染。但是有时 A260/A230 的比值不在