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- 文献和实验
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534
- 英文名:
Hot Start Taq Plus DNA Polymerase
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别提示:包括热启动Taq Plus DNA聚合酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:热启动Taq Plus DNA聚合酶
英文名称:Hot Start Taq Plus DNA Polymerase
产品规格:250U
本制品是Taq Plus经特殊工艺处理后的制品。经处理后的Taq Plus酶在热激活前,其聚合酶活性被抑制,从而抑制低温条件下由引 物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。本制品适用 于高特异性PCR反应、Multiplex PCR、高GC含量(>60%),有二级结构等有较强背景的基因组扩增的扩增和大规模基因组扩增检测。与 HotStart Taq DNA聚合酶相比,具有扩增长度增加(简单模板可有效 扩增20kb,复杂模板可有效扩增10kb), 保真度好的特点。
产品组成:
| 组份 | JN0024-250U |
| HotStart Taq Plus(5U/μl) | 50μl |
| dNTP混合液(各10mM | 200μl |
| 5×HotStart Taq Plus Buffer with Mg2+ | 2ml |
产品特点:
1、简便:与常规热启动酶反应条件一致,无需改变PCR程序设置(图 例一)。
2、高效:有效减少了杂带及拖带产生,从而实现高特异性的PCR。
3、灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
产品用途:
1、高特异性PCR反应;
2、复杂模板扩增;
3、Multiplex PCR;
4、基因组扩增检测;
5、大片段PCR扩增反应 (可达 20 kb)。
使用建议:使用本试剂扩增得到的PCR产物3′端有一突出"A"碱基,可直接克隆于T载体中。
应用实例:
图例一) 50μl扩增体系中, 以50ng人基因组DNA为模板,HotStart Taq plus可对特定基因 片段(170bp)进行高特异性扩增。
泳道M:DNA 2000 Ladder; 泳道1:Taq酶 1.25U;泳道2: Hot Start Taq酶,1.25U
质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一 的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留, 无核酸内、外切酶污染。
活性定义:在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入 反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。
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文献和实验对于 Taq 酶扩增性能更强。 1. 选择热启动酶降低非特异性扩增 在使用 Taq 酶进行扩增时,有时会出现非特异性扩增,可能的原因可以从模板、引物、体系、程序中一一排查。如模板是否被污染,引物特异性如何,Mg2+浓度偏高等等,其中一个不可忽视的原因是 DNA 聚合酶的种类是否合适。如果排查了其它原因仍旧有非特异性产物,可以选择热启动酶重新实验,即可有效减少或消除体系中其它产物的积累。常用的热启动酶分为两类:一类是化学法修饰的热启动酶,如 Ace Taq ,预变性 95℃5 - 10 min 即可
Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌,能在70~75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的. (一)酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基,编码832个氨基酸,酶蛋白分子为 94KDa.其比活性为200000单位/mg.75~80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷 酸,70℃延伸率大于60个核苷酸/秒,55℃时
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