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- SY0289-QDW
- 北京
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
993
- 英文名：
Reverse Transcriptase I
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别提示：包括耐热逆转录酶I在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：耐热逆转录酶I
英文名称：Reverse Transcriptase I
产品规格：2000U
本产品是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上经过多点突变得到的全新逆转录酶。本产品热稳定性提高，在50℃下活性最高，且可耐受高达55℃的反应温度，适用于具有二级结构的RNA模板的逆转录，能稳定可靠地合成cDNA。该酶与模板的亲和力增强，可获得更多全长的cDNA，并可检测到低至1 pg的总RNA，特别适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。此外，本品降低了逆转录过程的错配率，提高了克隆的保真度。
产品组份：
5×Reaction Buffer——————100μl
Reverse Transcriptase I (200 U/μl)————10μl
活性定义：以Poly(rA) Oligo(dT)为模板/引物，在37℃，10分钟内，掺入1 nmol的dTTP为酸不性溶物质所需要酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本品和1 μg小鼠肝脏总RNA在37 ºC下孵育1小时，RNA电泳谱带不发生变化。
功能检测1：逆转录体系中加入200 U本品，以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)18为引物，50 ºC反应45分钟。取10% cDNA产物进行PCR扩增DNCH基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的5.6 kb条带。
功能检测2：逆转录体系中加入200 U本品，以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)18为引物，50 ºC反应30分钟。取10% cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。
注意事项
1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
2）为保证逆转录成功，建议使用高质量的RNA样本。
3）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
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文献和实验逆转录反应，作为分子生物学研究的基本技术之一，已经广泛应用到多个研究领域，可以说是科研人员进行 RNA 功能研究的看家本事。 众所周知，逆转录的应用领域有以下 6 种： 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR） 定量RT-PCR（RT-qPCR） cDNA 克隆和文库构建 cDNA 末端快速扩增（RACE） 基因表达芯片 RNA 测序（RNA-Seq） 今天，小编就整理了一些贴士，帮助大家在面对 6 种不同的应用时，如何正确选择逆转录酶。 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR） 在 RT
又称 RNA指导的 DNA聚合酶。是以 RNA为模板合成 DNA的酶。这种酶是 1970年美国科学家特明（ H.M.Temin）和巴尔的摩（ D.Baltimore）分别于动物致癌 RNA病毒中发现的，他们并因此获得 1975年度诺贝尔生理学或医学奖。当 RNA致癌病毒，如鸟类劳氏肉瘤病毒（ Rous sar-coma virus）进入宿主细胞后，其逆转录酶先催化合成与病毒 RNA互补的 DNA单链，继而复制出双螺旋 DNA，并经另一种病毒酶的作用整合到宿主的染色
耐热DNA聚合酶特点： 合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。 TIANGEN公司生产的耐热DNA聚合酶全部采用标准化生产工艺和质量检测标准，是经过多次分子筛、离子交换层析柱纯化的超纯型产品，去除了宿主DNA和蛋白酶等杂质因素的影响，特异性非常好，而且特别稳定，经检测，室温
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