耐热逆转录酶I

特别提示：包括耐热逆转录酶I在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：耐热逆转录酶I
英文名称：Reverse Transcriptase I
产品规格：2000U

本产品是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上经过多点突变得到的全新逆转录酶。本产品热稳定性提高，在50℃下活性最高，且可耐受高达55℃的反应温度，适用于具有二级结构的RNA模板的逆转录，能稳定可靠地合成cDNA。该酶与模板的亲和力增强，可获得更多全长的cDNA，并可检测到低至1 pg的总RNA，特别适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。此外，本品降低了逆转录过程的错配率，提高了克隆的保真度。

产品组份：
5×Reaction Buffer——————100μl
Reverse Transcriptase I (200 U/μl)————10μl

活性定义：以Poly(rA) Oligo(dT)为模板/引物，在37℃，10分钟内，掺入1 nmol的dTTP为酸不性溶物质所需要酶量定义为1个活性单位（U）。

质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本品和1 μg小鼠肝脏总RNA在37 ºC下孵育1小时，RNA电泳谱带不发生变化。
功能检测1：逆转录体系中加入200 U本品，以500 ng Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)18为引物，50 ºC反应45分钟。取10% cDNA产物进行PCR扩增DNCH基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的5.6 kb条带。
功能检测2：逆转录体系中加入200 U本品，以100 pg Hela cell total RNA为模板，Oligo(dT)18为引物，50 ºC反应30分钟。取10% cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的550 bp条带。

注意事项
1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
2）为保证逆转录成功，建议使用高质量的RNA样本。
3）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。