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- 百奥莱博
- ALH029-BYG
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
630
- 英文名：
Bacterial total RNA Extraction Kit
- 保质期：
6个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
室温
特别提示：包括细菌RNA提取试剂盒(柱式吸附去除DNA)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：细菌RNA提取试剂盒(柱式吸附去除DNA)
英文名称：Bacterial total RNA Extraction Kit
产品规格：20次|50次
本试剂盒是在无*酚、*仿RNA快速提取技术基础上，又采用基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒特点：
1.完全不使用有毒的*酚，*仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
3.独特研发成功基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。
试剂盒组份：
| 组份 | 20次 | 50次 |
| TE (PH8.0) | 6ml | 6ml |
| 溶菌酶 | 20mg | 20mg |
| 裂解液RLT Plus | 10ml | 25ml |
| 去蛋白液RW1 | 15ml | 40ml |
| 漂洗液RW | 5 ml | 10ml |
| RNase-free H2O | 10ml | 10ml |
| 吸附柱和收集管 | 20套 | 50套 |
| 基因组DNA清除柱和收集管 | 20套 | 50套 |
注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到100%无残留），本试剂盒提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术，绝大多数DNA 已经被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup),请联*(代"系")我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱上进行DNase I处理。请联*(代"系")我们索取具体操作说明书。
5. RNA 纯度及浓度检测:
完整性： RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA 不纯。
浓度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free 水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40
储存条件：室温，有效期6个月
本制品别名：细菌RNA快速提取试剂盒|快速提取细菌RNA试剂盒
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文献和实验细胞/细菌总 RNA 提取试剂盒操作指南（DP430） ——细菌
以下操作按照天根产品 DP430 细胞/细菌总 RNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 细菌培养液，溶菌酶（RT401，客户自备，提取细菌总RNA时需配备。）2. 无水乙醇 ，β-巯基乙醇3. 一次性无菌注射器（DNase I配置），移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml）1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free）4. 通风橱 涡旋
FDA、SFDA对重组蛋白、vero细胞疫苗等生物制品的DNA残留均有严格要求，近年来包括大牌进口产品在内的狂犬疫苗DNA残留超标问题，引起了社会和业界的广泛关注。为什么一个看似简单的问题，却给众多专业人员带来如此大的困扰？一方面是由于DNA超强的化学稳定性，另一方面是由于DNA其带有大量的电荷易与其他生物大分子结合从而产生聚集（吸附）、包裹作用而难以完全除去。DNA的去除方法主要有层析、膜过滤、离心、沉淀、酶解等方法。这里对工业上应该最广泛和有效的离子交换层析、鱼精蛋白沉淀、酶解三类方法进行
/RNA同时加到吸附柱上去。如何去除DNA是第一个难点。否则会残留大量DNA。两个技术难点的没有掌握导致了国内公司包括的第二种试剂盒失败。国外公司因为没有掌握第一难点，裂解液里面没有去除多糖多酚成分，所以包括Qiagen的RNeasy plant mini kit盒子也常常不能成功提取较复杂植物RNA样品如黑加仑、冬青等植物样品。 北京艾德莱生物的研发人员经过3年的不断研发改良，针对多糖多酚植物的特点，和这两种试剂盒失败的原因，开发出了世界领先水平的RN09 EASYspin植物RNA快速提取试剂盒
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