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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
162
- 英文名:
The instantaneous sticky ends of premixed liquid ligase
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格:
250次|50次
特别提示:包括瞬时粘性末端连接酶预混液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:瞬时粘性末端连接酶预混液
英文名称:The instantaneous sticky ends of premixed liquid ligase
产品货号:SV1035
产品规格:250次|50次
特性:
瞬时连接粘性末端
dsDNA 切刻修复
构建高丰度克隆文库
概述:
瞬时粘性末端连接酶预混液是一种即用型 2X 预混液,内含 T4 DNA 连接酶、专属连接增强剂和经过优化的缓冲液。该预混液是专门为瞬时连接粘性末端(2-4 bp)和提高转化效率而设计,它还简化了建立反应所需的步骤,优
化了酶和缓冲液的比例。因为该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态,所以使用时无需解冻,特别是无需温育时间就能高效连接粘性末端底物,反应时仅需加入预混液及互补末端 DNA,混匀后转化,从而节省了克隆连接反应的时间。此外,亚克隆连接可以以低浓度在很小的体系里完成,节省用户宝贵的 DNA 样品,并且无需稀释可直接转化到多种化学感受态大肠杆菌中。
来源:
纯化自重组 E. coli 菌株,含有编码 T4 DNA 连接酶的基因。
反应条件:
在 10 μl 反应体系中加入 1X 瞬时粘性末端连接酶预混液和 DNA 底物。10 μl 反应体系中包含 1,800 个 T4 DNA 连接酶粘性末端单位。
质保声明:
该试剂经过严格的质量控制检测,以确保酶的高纯度和高效率。
注意事项:
该预混液在 -20℃ 储存时为液体状态。-70℃ 保存时,反复冻融 20 次后,检测反应效率无明显变化。
除了瞬时粘性末端连接酶预混液,,我公司还供应以下相关产品:
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文献和实验PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
酶。 图 1.非特异性扩增(左图)与使用热启动 DNA 聚合酶进行的特异性扩增(右图)。 如何为您的 DNA 聚合酶选择正确的形式 还有更多需要考虑的因素。选择可以简化您工作流程的聚合酶形式。PCR 聚合酶形式的选择包括即用型预混液、用于直接凝胶上样的含染料缓冲液以及用于直接 PCR 分析的所有必要成分的完整试剂盒。 使用预混液,您只需添加模板和引物,然后,开始 PCR 实验。如果您想进一步减少操作步骤,使用含染料缓冲液的聚合酶允许 PCR 产物直接凝胶上样(注意:确保染料与下游应用兼容)。直接
1. 如何选择合适的限制酶切位点? 在载体构建实验过程中,限制性酶切位点的选择是决定克隆成功率和后续实是否顺利的关键步骤。选择时需综合考虑载体特性、目的基因序列、酶的反应特性及实验需求,我们可以从以下几个角度分析: ①确保酶切位点在载体和目的基因上均存在且唯一:这是选择的基本要求,避免载体被切成多个片段; ②通过双酶切实现 「定向克隆」,避免反向连接:单酶切可能会导致目的基反向插入载体(该情况会导致表达失败),因此建议优先选择两种不同的限制酶进行双酶切,利用其产生的不同粘性末端(或平末端)实现
限制和修饰现象在上个世纪中期被人们所发现,到 2005年1月,已经发现4342 种限制酶和甲基化酶,其中限制酶有3681 种。限制性内切酶有特定的识别位点和切割位点,切割后可产生平末端或粘性末端。酶切有标准的反应体系,受末端长度的影响,有位点偏爱性,在极端非标准条件下会产生星星活性。通过酶切连接可以增减酶切位点,酶切位点在基因组中的分布是不均匀的。大肠杆菌有三种甲基化酶和三种依赖于甲基化的限制系统。甲基化对限制酶切影响。基因操作常用的 DNA 聚合酶有大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ,T4、T
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